免疫组化实验流程介绍：
英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤：
1、SP三步法
1）石蜡切片，常规脱蜡至水。
2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。
3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟
4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.
5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。
6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。
7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。
8）PBS冲洗，3分钟×5次。
9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。
10）PBS冲洗，3分钟×5次。
11）显色剂显色（DAB等）。
12）自来水充分冲洗。
13）可进行复染，脱水，透明。
14）选择适当的封片剂封片。 免疫组化怎么做？步骤方法？甘肃病理免疫组化推荐
免疫组化的DAB显色时间如何把握？
1、DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；
2、DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；
英瀚斯生物病理平台，一站式解决各种染色需求。
3、此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；
4、DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（比较好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。 吉林靠谱免疫组化怎么选择英瀚斯生物，专业承接免疫组化等各类病理染色检测！
英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h，脱蜡至水，用PBS冲洗三次，每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复，中火至沸后断电，间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
6、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
7、PBS洗3次，每次5min。
8、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
9、PBS洗3次，每次5min。
10、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
11、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。
免疫组化（IHC）利用抗体检测组织切片中蛋白质和其他抗原的定位。
英瀚斯生物实验外包，自有专业病理实验室，可高效完成免疫组化检测。
抗体-抗原的相互作用通过有色酶底物显色检测或荧光染料荧光检测进行观察。虽然IHC在定量方面不如蛋白质印迹或ELISA，但是IHC可以提供完整组织中蛋白定位的宝贵信息。蛋白表达谱对病理学家以及作为诊断工具都具有重要意义。
IHC实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案，而该方案应使用高质量的特异性试剂。 英瀚斯生物，组织包埋、切片、染色、免疫组化拍照、报告分析，一站式搞定！
细胞属性的判定，免疫组化也可以进行这方面的临床应用。通过特定抗体标记出细胞内相应的抗原成分，来判定细胞的属性，确定cancer的来源。如细胞角蛋白(CK)是上皮性标记，CK阳性提示cancer为上皮源性cancer;降钙素抗体是甲状腺髓样cancer特有的标记;甲状腺球蛋白(Tg)阳性提示是甲状腺滤泡性cancer;前列腺特异性抗原(PSA)只见于前列腺上皮;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性则提示胶质cancer;CD20和CD79a阳性则提示B细胞淋巴瘤;平滑肌肌动蛋白(Actin)阳性提示cancer为平滑肌源性;胃肠道间质瘤中原cancer基因蛋白产物CD117阳性;血管源性cancer中内皮细胞标记物CD34阳性等等。如果您需要做实验外包，可以与我们英瀚斯生物进行联系。免疫组化IHC详细介绍！吉林靠谱免疫组化怎么选择
免疫组化相关知识汇总。甘肃病理免疫组化推荐
免疫组化原理及实验步骤——实验外包。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第1抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。甘肃病理免疫组化推荐
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