一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)将无组织纤维、脂肪和多糖残留的鼠尾腱,真空冷冻干燥备用;(2)冻干鼠尾腱经低温冻干粉碎至200?400目; (3)在冰水浴中将粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶胀,鼠尾腱与醋酸的固液比为I克:10mL?I克:120mL,期间不断搅拌,防止冻结成块,得到胶原溶胀液; (4)称取胃蛋白酶加入到胶原溶胀液中,鼠尾腱与蛋白酶质量比为50: I?100: 1,在4°C,48?74小时酶解,期间间歇性搅拌; (5)将黏稠的胶体溶液进行高速冷冻离心处理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中,不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出,4°C沉淀10小时,去除上清液,絮状溶液高速冷冻离心处理,收集沉淀。鼠尾胶原醋酸溶解:将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中。石家庄正规鼠尾胶原哪里买
鼠尾Ⅰ型胶原:组装液的配置:1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化钾 100 mL,用1 mol/L 氢氧化钠调节酸碱度至9.2。2.胶原纤维的重构吸取胶原10μL至小培养皿中,倒入0.5 mL自组装液,室温放置20 min。予自组装液自组装24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培养皿中,将自组装24 h的胶原浸泡在戊二醛中。然后将胶原经去离子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后进行TEM观察。3.生物矿化形成仿生骨材料静滴配置钙磷矿化液将25mL钙液(10 mmol/L 二水氯化钙+150 mmol/L氯化钠+50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷+0.02%三氮化钠)倒入烧杯中,滴入聚丙烯(PAA)至浓度350 μg/mL;滴加1 mol/L的氯化氢,调节酸碱度至7.4,然后缓慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氢二钠),约16滴/min。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。厦门开封鼠尾胶原注意事项:在室温下pH 中性时可迅速成胶,在操作过程中要 尽量保持低温。
一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法:一般的生物体中提取的胶原蛋白多为混合型,之前多从牛皮、猪皮、牛腱中提取, 但这类胶原蛋白不光有油脂等其他杂质,也存在着II型及其他一些胶原蛋白亚型;同时, 这种畜牧业大量饲养的动物存在着例如疯牛病等一些生物性疾病及病毒传染,如果用此开发医用产品更加存在着品质的不稳定及潜在的风险及危害;再次,人的真皮中主要含有I 型和III型,但III型不易大量获得,故应用单一的I型胶原蛋白是解决体外应用的医用产品引起的抗原性问题的关键,这也是I型胶原蛋白抗原性低的原因之一。同时,I型胶原蛋白的三重螺旋的氨基酸结构决定了它的一些特有的性能,如机械性能、促进细胞生长、弱抗原性、可生物降解性和胶原的自缔合性。
一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血的优点:1、本发明制作的止血材料采用温和的冷冻干燥操作工艺不光光提高了生产效率, 同时避开了使用其他设备带来的成本上升问题。2、本发明专利生产的止血材料(止血海绵),其动物实验表明其具有非常好的止血效果。也可应用于内脏出血。具有广阔的应用前景。3、本发明制备的止血材料具有可完全被人体吸收,与出血创面一接触,其接触面迅速形成凝胶而粘附在出血创面上,外面则形成连续的压迫干层。启动凝血因子。同时,聚乙烯醇为成膜材料,两种的协同效应形成了一种理想的止血状态和结构。鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用。
提取鼠尾腱胶原工艺的优化:单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的较佳工艺参数为浸提时间72h、乙酸浓度0.5mol·L-1、料液比为1∶40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论:成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的较佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。制备鼠尾胶原:吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。天津正规鼠尾胶原价格
自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性。石家庄正规鼠尾胶原哪里买
一种基于鼠尾胶原蛋白:1.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于冻干止血材料中,各材料重量配比为鼠尾胶原蛋白聚乙烯醇壳聚糖为5% 2% 1%,余量的水。2.根据权利要求1或2所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于鼠尾胶原蛋白来源于各品系SFP级大鼠鼠尾。3.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于剂型为创可贴。4.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于剂型为喷雾剂。石家庄正规鼠尾胶原哪里买
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鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B.含细胞的三维胶原的制备(以配制200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10PBS10培养液,混匀(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放20分钟待胶凝固后,加入适...