南昌正规无血清细胞冻存液生产厂家

无血清细胞冻存液的使用方法及注意事项：1.将分装好的细胞冻存管，直接置于-80 度冰箱过夜保存，次日投入液氮中保存即可 备注：1、冻存过程中，第2 步在冰袋附近操作时，低温避免保护剂对细胞造成损伤。 2、细胞冻存管一定要保证完全密封，否则在复苏过程中有可能会炸 （1）提前开启水浴锅，温度调节到37（2）将冻存的细胞冷冻管从液氮中取出，迅速置于水浴锅中融化，尽量1min 融化，时间越短，对细胞影响越小。（3）将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充 分混匀，（如细胞冷冻保存液为500ul，则加入到5ml 新鲜培养基中， 如细胞冷冻保存液位1ml，则加入10ml 新鲜培养基中。）（4）混匀后立即离心，800 转，3min 即可离心结束后弃上清，加入预温的新鲜培养液。（5）混匀后分瓶置于二氧化碳培养箱中培养。（二氧化碳浓度根据培 养基要求决定，通常为5%【注意事项】细胞系 冻存密度 备注 正常人成纤维细胞 1～310 cells/ml杂交瘤细胞 1～310 cells/ml某些hybridoma 会因冷冻浓度 太高而在解冻24小时后死去。快速冻存简化了冻存步骤，同时不需要使用梯度冻存盒。南昌正规无血清细胞冻存液生产厂家

细胞冻存液的作用是什么？渗透性冷冻保护剂：可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非渗透性冷冻保护剂：不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷冻保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。厦门重庆无血清细胞冻存液将分装好的细胞冻存管，直接置于-80 度冰箱过夜保存。

产品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，无需降温，节省时间和精力；b.即用型，无需现配，操作方便，可减少实验中因操作引起的污染；c.在多种哺乳细胞系中经过性能验证，其复苏率和活率达90%以上；d.可长期存储于-80℃冰箱(5年以上)，取用方便；e.采用成分明确的无血清配方，价格比常规自配细胞冻存液更为低廉；保存温度：2~8℃具体操作步骤：1、培养皿或培养瓶中细胞按常规方法消化，或分离获得原代细胞后，收集于离心管中。2、使用离心机离心，去除上清，收集细胞沉淀。3、根据细胞生长密度加入适量的细胞冻存液进行重悬，充分混匀(推荐冻存密度为 1-2×106/ml)。4、将细胞悬液分装至冻存管中，直接放置于-80℃冰箱保存。24小时后可移入液氮长期保存(可选)。

如何提高细胞冻存成功率：1.没有控制好细胞的生长密度细胞的密度对细胞的生存质量有着重要的影响，毕竟它们是一群又不能挤着了也不能孤独的娇贵宝宝。密度过高会让细胞没有足够的生存空间，密度过低会让细胞无法互相连接健康生长。建议大家在细胞接种前，一定要调整好适合细胞生长的浓度，提高细胞的存活率。2.温度控制不达标慢冻快融是细胞冻存复苏的中心关键词之一。常规的冻存操作中，都会要求严格的梯度降温，常见的是 -4℃ → -20℃ 至 - 40℃→ -80℃ → 液氮，一定要避免温度原因导致细胞自取消灭；除非使用了成分经过优化、经过严格测试的冻存液，才能免去程序降温这个繁琐的步骤。保存的时候也要保证整个细胞都是处于液氮的液面下方，避免温度对细胞存活的影响。无血清细胞冻存液的优势：无血清细胞冻存液是不含血清和动物源成分。

血清血液成分（加入抗凝剂）血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆比较大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。无血清冻存液使用方法：将冻存管直接转移至-80C水箱中冷冻保存。徐州武汉无血清细胞冻存液

无血清细胞冻存液使用方法：取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中。南昌正规无血清细胞冻存液生产厂家

冻存细胞注意事项：冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得较佳结果。在细胞处于生长期密度达到70-90%的情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代尽可能靠前。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意较佳冻存条件取决于所用细胞系。细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器，使温度每分钟大约降低1°C。必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂。南昌正规无血清细胞冻存液生产厂家

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