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细胞转染的注意事项：细胞状态这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于较佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。细胞复苏后的3代左右时细胞状态较好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化。大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。或者，几种来源于经筛选，转染效率较高细胞亚系的细胞系现在有售~直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。厦门正规细胞高效转染试剂厂家现货

细胞转染，你至少要掌握以下几点：胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越普遍。可分为瞬时转染，稳定转染等。瞬时转染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72h内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，通常需要一些选择性标记反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。合肥细胞高效转染试剂厂家大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释。

影响转染试验的因素：细胞状态变化：（1）转染试剂与细胞不匹配细胞转染较适合的不是原代细胞，也不是传代很多次的细胞。这是因为细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。较适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞，细胞生长旺盛，较容易转染。（2）把握时机没错！转染也有适当的时机，相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄取并表达外源DNA。因此对大多数转染操作而言，细胞都在转染当天或前现在种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于过度生长的状态，如细胞数量过多，互相叠加，营养物质耗竭，代谢废物积聚，转染率低下也是很正常的！

细胞转染那些事儿：1.选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前现在铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。2.对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。3.支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。4.细胞转染时需要一定的细胞密度，以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。

细胞转染实验的方法有哪些：1..电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡率高。每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。2.细菌介导的传染。传染需要将目的基因克隆到特定的细菌体系中，经过包装细胞的包装得到改造后的细菌，再进行传染。优点是转染效率特别高，尤其是难以转染的原代细胞、细胞。缺点是构建细菌周期长，环节多，易出错，费用也高。一类是瞬时转染，一类是稳定转染（很长转染）。上海细胞高效转染试剂进货价

在转染过程中是可以使用血清的。厦门正规细胞高效转染试剂厂家现货

DNA细胞转染步骤：1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。注意：①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加物品。厦门正规细胞高效转染试剂厂家现货