线性PEI转染试剂protocol

PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限，被逼无奈只能放弃脂质体2000，选择PEI，以至于相当长的时间内，转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点：1. PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书，所用质粒尽量去内2. 转染时，一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中，顺序不可错，轻微混匀，静止20 min3. 转染后4小时，一定要换液！换含有FBS的完全培养液！因为PEI对细胞毒性太大4. 如果后续试验涉及到稳定筛选，建议把血清浓度适当提高。PEI转染试剂的稳定性如何？线性PEI转染试剂protocol

稳定转染方法1.接种细胞：转染前，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。国产PEI转染试剂优化方案PEI转染试剂主要用于大规模的蛋白表达和病毒包装。

稳定转染方法：1.接种细胞：转染前，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。

准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。PEI转染试剂如何溶解和配置？

线性化聚乙烯亚胺pei25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上线性化pei可改善负电荷染料的物理外观以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上;线性化pei能与dna或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(vector carrier),即转染试剂。上海曼博生物医药科技有限公司成立于2019年，依托于集团公司泉心泉意深厚的资源和超过400家国内客户群体，生命科学领域一站式供应链体系，以及高风险生物危险材料进出口平台的优势.PEI转染试剂对复合物孵化的时间是有要求的，一般建议5~20分钟之间。国产PEI转染试剂品牌比较

哪个分子量的PEI转染试剂好？线性PEI转染试剂protocol

转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。转染24h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在CO2培养箱中37℃孵育过一晚。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。线性PEI转染试剂protocol

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