本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术:近年来,随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用,成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中,血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是,由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物,例如血液中含有血红素,蛋白质,脂肪,抗凝剂等,唾液和口腔拭子含有蛋白质,脂肪,抗凝剂等,使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此,现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA,才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多,传统酚氯仿抽提法,高盐盐析法,模离心柱吸附法,磁珠法,等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞,将血红素物质释放出来,然后离心,清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞,释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。北京泡沫口腔拭子生产产家
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增,方法如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①:50℃,2min,循环1次。步骤②:95℃,5min,循环1次。步骤③:95℃15s,55℃30s(收集荧光),循环40次。结果分析:平行扩增的荧光定量PCR反应中,阴性对照无扩增,说明反应体系正常,无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本,然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测,结果如图1所示。 河北医用口腔拭子源头直供这款口腔拭子经过抗菌剂的特殊处理,防止微生物污染。
紫蓝色结节、瘘孔等,分泌物量、性质、颜色、气味等,阴道有无横隔、纵隔、斜隔、狭窄、闭锁、双阴道等畸形,宫颈大小、形状、色泽,有无糜烂、旧裂、赘生物、紫蓝色结节及接触性出血等,宫颈管分泌物性状,宫颈阴道段长度及双宫颈畸形等。盆腔检查检查前先排便,排便困难者可先导尿及服用缓泻剂,有阴道出血者需先消毒外阴并戴无菌手套;月经期一般不做盆腔及阴道检查;未婚者一般*作肛门指诊检查。
(1)双合诊:即阴道腹部双合诊。检查者戴无菌手套,以示指、中指蘸润滑液后顺阴道后壁轻轻插入,检查阴道有无肿块、狭窄、瘢痕、弹性等,子宫颈高度、大小、质地、硬度,有无举痛,后穹窿是否饱满,软硬度,有无弹性,结节、肿块、浸润、触痛。然后将另1手置于下腹壁与阴道内手指配合检查盆腔生殖器先作宫体触诊,注意子宫体大小、位置、形状、硬度、活动度及有无压痛。将内诊指放在一侧穹窿,双手检查附件与宫旁组织有无增厚、压痛、包块,如有肿块需查清大小、活动度、质地、形状,有无触痛以及与子宫有无粘连,有无向周围组织脏器浸润等,先查不痛的一侧,然后再查对侧。
(2)三合诊:又称阴道直肠腹部三合诊。用示指插入阴道、中指插入肛门内触诊。
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