外泌体的提取、纯化和鉴定:每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体,并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学(电子显微镜技术)、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用,如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构,能比较好的保护其包被的物质,且能靶向特定细胞或组织,因此是一种比较好靶向给药系统。外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)。宇枚博
细胞摄取诊疗性外泌体:从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用,包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体的内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合,从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。细胞外泌体抗体是什么一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。
外泌体与免疫反应、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中枢的神经系统相关疾病和病症进展相关。由外泌体传递到受体细胞的蛋白质、代谢物和核酸有效地改变了它们的生物反应。这种外泌体介导的反应可以促进或阻止疾病。外泌体在调节复杂的细胞内通路方面的固有特性使其在许多疾病的诊疗控制方面具有潜在的用途,主要包括神经退行性疾病和病症。外泌体可被设计用于递送不同的诊疗有效载荷,包括短干扰、反义寡核苷酸、化疗药物和免疫调节剂,并具有将其递送到预期目标的能力。
细胞摄取诊疗性外泌体:从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用,包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合,从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。近年来,随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。外泌体可以通过多种方法给药,静脉内给药是较常用的途径。
AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器,将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内,根据称重精确测量流体体积,可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶,避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间,当达到设定的提取体积后,转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集,到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率,而且由于采用微滴计数的方法进行定量,可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值,对所测样品中的核酸分子进行一定定量。外泌体的存在:外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中。外泌体的研究
超速离心法,这是目前外泌体提取较常用的方法。宇枚博
根据内侵量的不同,可以产生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs产生的MVBs具有确定的ILV聚集(未来的外泌体)。MVBs可以与自噬体融合,较终其内容物在溶酶体中降解。降解产物可被细胞回收利用。MVBs也可以直接与溶酶体融合降解。不遵循这一轨迹的MVBs可通过细胞骨架和微管网络转运至质膜,借助mvb-停靠蛋白停靠在质膜的腔侧。随后胞吐导致具有与质膜相似的脂质双分子层方向的外泌体的释放。有几种蛋白参与了外泌体的生物发生,包括RabGTPases、ESCRT蛋白,以及其他也被用作外泌体标记的蛋白(CD9、CD81、CD63、flotillin、TSG101、神经酰胺和Alix)。宇枚博
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