外泌体(Exosome)是由活细胞分泌的直径约为30-150nm的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构;存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中;外泌体携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息,不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用,更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。首都医科大学附属北京佑安医院李伟华等人在MolecularCancer杂志发表的有关外泌体研究的综述:分别介绍了1、外泌体在慢性乙型肝炎至肝细胞*过程中的作用2、外泌体与肝细胞*的关系3、外泌体在肝*诊断和预后中的应用4、外泌体在肝****中的应用,对相关涉及的***研究内容进行总结以揭示外泌体在肝*的发***展,诊断和***中的重要性,为研究人员进一步阐明外泌体在肝*中的作用机制,并促进外泌体在临床诊断中的应用和肝*的***提供参考。外泌体提取鉴定分离实验平台,认准南京英瀚斯。山西值得信赖的外泌体哪家好
外泌体提取,PEG-base沉淀法,聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。通过差速超速离心法(Differential Ultracentrifugation)从细胞培养基上清或血浆血清中提取外泌体。四川专门做外泌体外泌体提取,实验经验丰富。
外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现, 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年, Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌 的 exosome可以被人的肥大细胞捕获,并且其携带的mRNA成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质,不仅只是mRNA,exosomes所转移的microRNA同样具有生物活性,在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中mRNA的水平。这一发现使得研究人员对exosome的研究热情激增,截止已经通过286项研究发现了41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA。
外泌体鉴定,可以用和表面抗原对应的抗体进行免疫印迹(WB)、透射电子显微镜(TEM)、纳米粒径分析(如NanoSight LM10)等来验证。前面也说了,ISEV建议用表面蛋白来界定所提取的细胞外囊泡,所以用CD63来做WB或ELISA是必不可少的了。使用Wako的PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP)(产品编号298-80601),既能鉴定外泌体的CD63信号,又能进行定量、定性分析,一举两得!南京英瀚斯可以做外泌体鉴定。外泌体作为内源性的天然药物载体有着独特的优势,表面由脂质和蛋白质组成,使其可以穿透许多生物膜,外泌体检测服务-价格低-周期短-数据清晰。
外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白,是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合,有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现于早期以及回收的核内体中,RAB7 和 RAB9主要出现于晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63, CD81 和CD9))、热休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。南京英瀚斯,外泌体检测服务,分离鉴定都能做。河北比较好的外泌体测序
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外泌体的生成,微泡是由质膜的出芽形成的,膜双层通过磷脂的不对称分布来维持脂质的“多面性”。外层富含磷脂酰胆碱和鞘磷脂,而内层主要由磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而,胞质Ca2+的内流可以破坏这种不对称性,导致磷脂跨膜双层的重新分配,促进膜起泡。依赖Ca2+的蛋白水解同时降解膜相关的细胞骨架,促进出芽过程。在外泌体形成过程中,首先,MVE(多囊体)向内芽形成小泡,内含来自细胞质的货物(蛋白质、mRNA和miRNAs)。然后,MVE要么与细胞膜融合释放外泌体(内囊泡),要么与溶酶体融合降解MVE含量。到达目的地后,外泌体通过内吞途径或与靶细胞膜融合,将其内容物释放到细胞质中。细胞的膜的囊泡也可以直接从细胞膜上萌发,携带活性蛋白、RNA和其他化合物。山西值得信赖的外泌体哪家好
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