选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。酵母菌富集培养基:葡萄糖5%,尿素0.1%,硫化铵0.1%,磷酸二氢钾0.25%,磷酸氢二钠0.05%,七水合硫酸镁0.1%,七水合硫酸铁0.01%,酵母膏0.05%,孟加拉红0.003%,pH4.5。富集好氧自生固氮菌:甘露醇1%,磷酸二氢钾0.02%,七水合硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,二水合硫酸钙0.01%,碳酸钙0.5%采样吸收液1-GVPC液体培养基 Grein –Meyers琼脂 葡萄糖天冬酰胺琼脂葡萄糖天门冬素琼脂。GAM肉汤
培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用:培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%) ,与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值。NEAA:非必须氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA 也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。麸皮液体培养基ETSA培养基基础 Stainer and Scholte液体培养基 RCVBN培养基 RCVBN琼脂培养基。
营养培养基(nutrient media) 在基础培养基中添加一些特殊的营养物质,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等,可供营养要求较高的细菌在其中生长。例如链球菌、肺炎链球菌等需在含血液或血清的培养基中生长;结核分枝杆菌的培养基中须添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。比较常用的营养培养基是血琼脂平板。增菌培养基(enrichment media) 一般为液体培养基,用于细菌的增菌培养,可泛用,也可专门用的,在专门用的增菌培养基中常含有目的菌生长所需要的特殊营养物质或生长因子。
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。可溶性淀粉琼脂 克氏柠檬酸盐琼脂 改良克氏柠檬酸盐琼脂 脲(尿素)培养基基础 七叶苷培养基。
细菌培养基之面粉琼脂培养基:面粉60g,琼脂20g,水1000ml把面粉用水调成糊状,加水到500ml,放在文火上煮30分钟。另取500ml水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。微藻培养基,BG-11培养基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (柠檬酸)0.006g,Ferric ammonium citrate(柠檬酸铁铵0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸馏水)919ml。
乳酸铁营养琼脂 MB培养基基础 乳酸铁营养肉汤 包姜氏液体培养基基础 无机磷细菌培养基Bushnell-Haas琼脂。MEB肉汤麦芽浸膏肉汤
TYGPN培养基 乳糖蛋白胨半固体培养基 M63肉汤培养基基础 M63琼脂培养基基础 LES远藤氏琼脂培养基。GAM肉汤
在培养基中加入 HEPES 有何好处?培养基中常用的缓冲体系是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理 pH 条件下会降低缓冲能力。而HEPES 是一种很强的缓冲剂,能使细胞培养基在 pH7.2-7.6 条件下缓冲能力增强。HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境,CO2 气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。GAM肉汤
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