近年来,外泌体的捕获技术越来越多,微流体系也被用于外泌体提取,此方法能根据其物理和生化特性同时分离外泌体。采用这种方法获得的样品纯度高,且可及时获取外泌体用于疾病的相关检测。在初次注射时外泌体粘附在微流控设备的内表面,并在随后的PBS注射中冲洗掉。此方法采用的设备复杂,所需的样本量取决于流动通道的长度。另外,样品量的注入速率比较低,因此,对于大样品量,将需要较长的处理时间。外泌体在包括瘤子在内的各种疾病的发病机理中具有重要的功能。目前,研究人员已经开发了多种方法来分离外泌体,离心技术仍然是常用方法,其他方法,例如过滤、磁珠分离和色谱法等,也显示出独特的优势,但目前仍然没有一种公认有效的提取方法,研究人员应针对不同来源的样本以及不同的下游分析选取较适宜的提取方案。基于外泌体的液体活检在病症和其他疾病的诊断和确定预后方面具有潜在的应用价值。安徽外泌体label free
Exosome,中文名外泌体,是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。2015年,随着精确医学概念的提出,越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和诊疗。外泌体作为一个新型的研究热点,由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性,已经成为了疾病诊断诊疗的潜在有效方式,在精确医学发展上有着光明的前景。鼻腔灌洗液外泌体PKH67外泌体产生于细胞中的多泡体。
全转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA,主要为mRNA和lncRNA、circRNA等非编码RNA。外泌体中携带有来自母本细胞的多种蛋白质、脂类、短链RNA和长链RNA等重要信息。对外泌体中的长链RNA进行全转录组测序及分析,不只能够筛选外泌体携带的特异Biomarker,同时对深入了解疾病或不同发育阶段的内在机制也有重要意义。外泌体全转录组测序体系,充分结合了微量核酸建库技术、NGS技术和全新的生物信息序列比对算法,可实现对1mL血浆中的外泌体即可进行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分测序,获取周全的外泌体转录组信息。
外泌体的基本信息:1、外泌体的大小:外泌体的直径约40-150nm。2、从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。3、外泌体属于胞外囊泡类,除了外泌体之外细胞还分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌体的直接比微泡的要小,后者直径为100nm-1μm。5、外泌体的数量:人体中大约有1014个,近乎于平均每个细胞产生1000-10000个。6、外泌体的细胞源:人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体。7、外泌体具有异质性,即使是同一种细胞分泌的外泌体都有可能具有比较大功能区别。8、外泌体的存在:外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中。9、外泌体产生于细胞中的多泡体。外泌体鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。
当外泌体在1980年初次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肉瘤侵袭等方方面面。有研究表明肉瘤来源的外泌体参与到肉瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了肉瘤的生长与侵袭。外泌体显示出了在诊疗各种疾病(如心肌病和神经病)方面的潜力。广州血浆外泌体
外泌体发挥功能方式:细胞-细胞之间的通讯,譬如抗原递呈,这是发挥功能的主要方式。安徽外泌体label free
外泌体的提取主要包括以下几种方式:1、免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。2、PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。3、色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。外泌体作为核酸的药物递送载体。安徽外泌体label free
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