ELISA与WB的原理一样,在抗体包被的微孔板中加入待测样品、封闭、一抗孵育,洗涤后加入酶标待测物形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,彻底洗涤后加显色剂并用酶标仪测定吸光值,结尾用标准曲线计算外泌体表达量。ELISA能实现对外泌体特异性蛋白的定量。其他外泌体鉴定方法还有微流体测定法和外泌体蛋白质组学分析等。由于外泌体在各种生命过程中的重要作用及其作为疾病生物标志物和药物输送系统的潜力,人们对此领域的兴趣越来越高。尽管目前在技术上取得了长足的进步,但尚未建立对外泌体进行准确和标准化鉴定以及定量的方法,关于外泌体的量应由囊泡颗粒的数量、囊泡蛋白的量或囊泡数与蛋白之比来定义仍存在比较多争论。建立外泌体分离、表征以及效价测定的标准化方法将是外泌体作为诊断和诊疗用途之前需要解决的问题。通过临床数据分析显示外泌体整合素可作为预测肿细胞转移的部位倾向性的诊断指标。体液提取试剂盒报价
磁珠免疫法分离外泌体:将针对目的抗原的抗体通过生物素-链霉亲和素连接到磁珠表面,然后将磁珠与样品共孵育,使外泌体特异性结合到磁珠上形成磁珠-外泌体复合物,再用蒸馏水或者PBS冲洗,结尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脱获得外泌体。该方法相对于ELISA的好处主要是,珠粒提供了更大的表面积来捕获外泌体,从而提高了分离效率。此外,使用磁珠时,样品起始体积没有上限,而基于微孔板的ELISA分析的较大样品体积为100μL,且ELISA洗脱杂质时容易造成孔间交叉污染。当将磁珠法与金标准外泌体分离方法进行比较时,磁珠法可分离出更纯净的外泌体,特异性高、速度更快,并且不需要昂贵的仪器。另外,与其他分离方法相比,磁珠法不影响外泌体形态。但是采用磁珠法时,外泌体生物活性易受PH和盐浓度影响。杭州外泌体示踪干细胞外泌体摄取流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法。
透射电子显微镜(TEM)和扫描电子显微镜(SEM)是用于评估外泌体形态、大小和表型的的两种常见的电子显微镜。SEM和TEM均使用电子束产生高分辨率的亚微米颗粒放大图像,以区分外泌体与残留在样品中相似大小的非外泌体颗粒,该方法还可用于检查样品的纯度。TEM与SEM之间的区别在于检测电子类别,在SEM中,电子与样品中的粒子相互作用时会发生散射,捕获并检测散射的电子,从而生成粒子图像。但是,在TEM中,不与粒子相互作用的电子穿过样品,并使用荧光屏进行检测。电子显微镜下外泌体大小不一,通常呈茶托样的圆形或椭圆形。采用电子显微镜检测外泌体时对样品的预处理和制备要求较高,外泌体的提取方法和品质会对电镜结果造成影响;另外样品的准备阶段比较复杂,不适合进行大量快速的测量;而且由于样本经过了干燥、固定以及冷冻等预处理和制备过程,对生物样本的结构会造成一定的破坏,从而影响观察的效果,无法准确测量外泌体浓度。安徽植物外泌体鉴定磁珠免疫法分离的外泌体,生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。
外泌体的提取分离的方法:1、超速离心法(差速离心):超离法是较常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行,可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定(可能与转子类型有关),纯度也受到质疑;此外,重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。2、密度梯度离心:在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。通过密度梯度离心,样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐,耗时。外泌体鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。
细胞摄取诊疗性外泌体:从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用,包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合,从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体,有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。杭州外泌体示踪
流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。体液提取试剂盒报价
全转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA,主要为mRNA和lncRNA、circRNA等非编码RNA。外泌体中携带有来自母本细胞的多种蛋白质、脂类、短链RNA和长链RNA等重要信息。对外泌体中的长链RNA进行全转录组测序及分析,不只能够筛选外泌体携带的特异Biomarker,同时对深入了解疾病或不同发育阶段的内在机制也有重要意义。外泌体全转录组测序体系,充分结合了微量核酸建库技术、NGS技术和全新的生物信息序列比对算法,可实现对1mL血浆中的外泌体即可进行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分测序,获取周全的外泌体转录组信息。体液提取试剂盒报价
上海宇玫博生物科技有限公司是一家一般项目:技术服务、技术开发、技术咨询、技术交流、技术转让、技术推广;生物基材料技术研发;生物基材料销售;五金产品批发;电子元器件批发;计算机软硬件及辅助设备批发;工艺美术品及收藏品批发(象牙及其制品除外);化工产品销售(不含许可类化工产品);实验分析仪器销售;环境保护设备销售;电力电子元器件销售;电子产品销售;机械设备销售;仪器仪表销售;办公用品销售;塑料制品销售;橡胶制品销售;劳动保护用品销售。(除依法须经批准的项目外,凭营业执照依法自主开展经营活动)许可项目:货物进出口;技术进出口。(依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动,具体经营项目以相关部门批准文件或许可证件为准)的公司,是一家集研发、设计、生产和销售为一体的专业化公司。公司自创立以来,投身于外泌体提取试剂盒,外泌体,外泌体检测,外泌体提取,是医药健康的主力军。宇玫博生物继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。宇玫博生物创始人宣之胜,始终关注客户,创新科技,竭诚为客户提供良好的服务。