外泌体检测优势

有研究表明外泌体通过唤醒瘤相关信号通路、诱导免疫耐受、重塑细胞外基质、增强瘤细胞侵袭性和调控瘤微环境促进瘤的发生和发展，外泌体在瘤的诊断上有诸多优势：外泌体可保护其中的核酸类物质，防止其迅速降解；外泌体的形成与亲源细胞的状态密切相关；针对外泌体内容物的检测比传统的瘤标志物更具有特异性；外泌体宽泛存在于多种体液样本中，以其为基础的瘤诊断可在病情发展过程中及时监测分子标志物的变化，这种检测更易监控且样本更易收集。近些年关于外泌体研究很普遍。外泌体检测优势

在血液和大多数体液（如尿液、脑脊液、唾液、胸腹腔积液、羊水和乳汁等）中均可检测到外泌体。血液外泌体的检测通常采用EDTA抗凝血分离的血浆，miRNA等一些微小RNA则采用血清样本。泌尿系统中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌体外膜则可帮助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌体miRNAs更具有应用价值。相较于血清中相关miRNA的水平，脑脊液外泌体中的miR-21可作为胶质瘤诊断和预后的指标，特别对预测中流复发或转移具有价值。唾液样本在安静状态下主要来源于舌下腺和颌下腺，刺激状态下则主要来源于腮腺。安徽外泌体Dil在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD9作为生物标记，通过将CD9与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有ganran力的病毒颗粒，通过ganran细胞或组织，实现外源基因在细胞或组织中表达。

外泌体的提取分离方法：1、超速离心法（差速离心）：超离法是较常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。2、密度梯度离心：在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时。PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。

妊娠期间胎盘可释放外泌体到全身循环系统，参与妊娠期间母胎界面的免疫调节、子宫螺旋动脉重塑和胎盘屏障的形成等重要事件调控，在正常妊娠过程维持中发挥重要作用。而很多妊娠并发症，如子痫前期等胎盘功能紊乱相关疾病的发生，很可能与胎盘来源外泌体异常密切相关。目前外泌体分离方法主要包括：多步差速离心、蔗糖密度梯度离心、试剂盒沉淀、免疫磁珠分选、色谱法、过滤离心等方法。其中，多步差速离心是制备外泌体的经典方法，该方法是根据外泌体的沉降系数差速离心将其分离出来，然而妊娠期母血清中除含有胎盘组织释放的外泌体，还包括许多其他种类细胞释放的外泌体，如树突状细胞、淋巴细胞等，且血清中可能还存在一些大小类似的物质混杂其中，这些因素都会影响胎盘来源外泌体的分离纯化。随着外泌体的功能逐渐被发现，近年来，应用这些功能的医治法也在被开发出来。胸水外泌体NTA

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体。外泌体检测优势

外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。外泌体的提取的方式：超速离心法。外泌体检测优势

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