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使用研磨仪、研磨棒或者使用超声破碎细胞的方法破碎细胞,加入去污剂,如sds等,除去膜脂。去除细胞内的蛋白质,包括与DNA结合的组蛋白,通过加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提等方法去除。加入RNA酶去除RNA,如实验不严密,可省略此步。沉淀DNA,需在冷乙醇或异丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。总结:DNA提取方法有下面⑦种一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。四.异丙醇沉淀法:基本同1法,*用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)五.表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和。本公司成产的DNA提取植绒拭子采用尼龙纤维植绒技术制作而成。
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植绒拭子其层与层之间是充分平行的,并且垂直于内部杆的表面,通过这个刷头进行DNA的采集。湖南鼻咽拭子植绒拭子批发
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