培养基中谷氨酰胺作用及使用方法?几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃ 冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基 4℃冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的 alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有较小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。如果细菌的生长受到限制,可以尝试调整培养基的成分或添加辅助物质,例如控制培养基中氧气的含量。Preston氏弯曲杆菌选择性琼脂添加剂
在培养基中加人某种抑制剂和指示剂,抑制某些细菌生长,促进目的菌的繁殖,并使所生长的细菌菌落具有一定特征,以助鉴别挑选,这类培养基称为选择性鉴别培养基。如SS琼脂,在该培养基配方中含有乳糖(反应底物)、中性红和柠檬酸铁铵(指示剂)、灿烂绿及胆盐等(抑菌剂)。灿烂绿和胆盐等抑菌剂能抑制革兰氏阳性菌及部分大肠埃希菌的生长,而对沙门菌及志贺菌基本无影响,而且大肠埃希菌能发酵乳糖产酸,使菌落变红色,沙门菌和志贺菌不发酵乳糖,其菌落为无色。如细菌产生硫化氢,则与柠檬酸铁铵反应生成硫化亚铁沉淀,菌落中心呈黑色或褐色。以此达到鉴别的目的。我妻氏血琼脂基础经过无菌处理的培养基能保证无細菌污染。
选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。酵母菌富集培养基:葡萄糖5%,尿素0.1%,硫化铵0.1%,磷酸二氢钾0.25%,磷酸氢二钠0.05%,七水合硫酸镁0.1%,七水合硫酸铁0.01%,酵母膏0.05%,孟加拉红0.003%,pH4.5。富集好氧自生固氮菌:甘露醇1%,磷酸二氢钾0.02%,七水合硫酸镁0.02%,氯化钠0.02%,二水合硫酸钙0.01%,碳酸钙0.5%
胰岛素(Insulin)作用普遍,包括调节脂肪和蛋白质的代谢以及促进细胞生长等。胰岛素功能的发挥源于其对细胞的作用,进而引起组织乃至机体的整体反应。一般可将胰岛素在细胞水平的作用分为三大类:代谢作用、促生长作用、以及代谢和促生长混合作用。胰岛素对细胞的代谢调节作用主要是通过其与细胞膜上的胰岛素受体(Insulin receptor, IR)相互作用而介导,而胰岛素对细胞的促生长作用则是通过其与细胞膜上胰岛素的样生长的因子受体(IGF Receptor, IG)相互作用而介导的。在无血清细胞培养液中,常添加胰岛素来维持细胞生长,调节细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄取、利用和贮存,同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。液体培养基、固体培养基和半固态培养基是常用的培养基种类。
通常用心、脑或其他脏器浸液配制厌氧菌培养基,并常需加入硫乙醇酸钠、半胱氨酸、肉渣、还原铁、活性炭等还原剂或除氧材料。在液体培养基中还可加入刃天青或亚甲基蓝作为氧化还原指示剂,以观察培养基的含氧程度。心、脑浸液、肝块、肉渣中含有不饱和脂肪酸,能吸收培养基中的氧。硫乙醇酸钠、半胱氨酸是较强的还原剂,能消耗溶解在培养基中的氧。干燥的活性炭和脱脂棉同样能吸收培养基中的氧。所以培养基中加入还原剂和吸收材料,目的都是为造成培养基的缺氧环境,使培养基保持较低的氧化还原电势。此外,还可在培养基表面加一层液体石蜡,以隔绝培养基与大气的接触。酵母培养基通常包含酵母营养素、碳水化合物和氮源。SB琼脂
培养基还可以根据所需生长的微生物类别,加入特定的营养物质,例如血清、血红蛋白等等。Preston氏弯曲杆菌选择性琼脂添加剂
不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3—+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。F值与氧分压和pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下,可通过增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压,或加入氧化剂,从而增加F值;在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。Preston氏弯曲杆菌选择性琼脂添加剂
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