外泌体制备工艺

随着科学研究的不断深入，目前已经发现外泌体是由通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体，多泡内涵体再与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的一种直径约30~120nm的膜性囊泡。外泌体介导瘤细胞的化疗抵抗。在瘤的治理过程中经常会出现药物耐受的情况，这会导致化疗失败，在这和过程中外泌体以多种途径参与了化疗抵抗这一过程。通常，发生EMT过程的瘤细胞可获得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使瘤表现为化疗抵抗。瘤细胞来源的外泌体能通过传递相关的组织因子(如VEGF、TGF2β)介导细胞发生EMT，从而增加瘤细胞的化疗抵抗能力。外泌体是具有生物活性的脂双层囊泡。外泌体制备工艺

Buller等利用miR-146b的质粒转染间充质干细胞，使其分泌的外泌体负载miR-146b，并将外泌体注射至移植到小鼠体内的GBM处。结果表明，这种利用外泌体运输miRNA进行zhiliao的方法可以有效抑制中流的生长。对于GBM类脑部中流，体内zhiliao不同于体外细胞实验，更需考虑脑部组织微环境对药物的影响，外泌体可运输miRNA并不破坏其在脑部中流组织处的原本功效。然而，至今还没有利用外泌体载药经静脉注射zhiliaoGBM的报道，这主要是由于跨越血脑屏障(BBB)仍然是外泌体进行脑部中流zhiliao需要解决的难题。尽管如此，Wood等报道的在进行阿兹茨海默病zhiliao时利用对脑部神经元特异性肽RVG靶向的外泌体穿过BBB的研究显示了经靶向修饰的外泌体具备穿过BBB的潜力，因此外泌体载药zhiliao具有广阔的前景。外泌体制备工艺外泌体具有良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性，使其在药物递送方向大有潜力。

在血液和大多数体液（如尿液、脑脊液、唾液、胸腹腔积液、羊水和乳汁等）中均可检测到外泌体。血液外泌体的检测通常采用EDTA抗凝血分离的血浆，miRNA等一些微小RNA则采用血清样本。泌尿系统中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌体外膜则可帮助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌体miRNAs更具有应用价值。相较于血清中相关miRNA的水平，脑脊液外泌体中的miR-21可作为胶质瘤诊断和预后的指标，特别对预测中流复发或转移具有价值。唾液样本在安静状态下主要来源于舌下腺和颌下腺，刺激状态下则主要来源于腮腺。

外泌体调控毛发根部的囊干细胞的机能，延长毛发根部的囊生长期，同时活化处于静止期的毛发根部的囊，使其提前进入新的生长周期，实现了毛发的再次生长。骨衰老小鼠注射外泌体试验证明：年轻血液中的外泌体同样使衰老的组织重新焕发生机。来源于脂肪组织中的干细胞分泌一些信号分子和生长因子，可以促使控制毛发根部的囊生长周期的毛发根部的囊干细胞进行分化，向上迁移生成表皮细胞和皮脂腺，向下迁移生成毛母细胞。毛发根部的囊的生长周期决定毛发的生长周期，而毛发根部的囊干细胞的机能决定了毛发根部的囊的活跃程度，外泌体靶向调控毛发根部的囊干细胞的功能。外泌体研究相对困难，需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。

外泌体大小不均可能是由于MVB的限制膜不均匀内陷，导致流体和固体的总含量不同；细胞的微环境和固有的生物学特性可能会影响外显体的含量及其生物学标记，如乳腺病细胞及其外泌体的蛋白质组可以显示来源细胞是上皮样细胞还是间充质样细胞；由于细胞表面受体表达的不同，外泌体对受体细胞的影响可能不同，可能诱导细胞存活，也可能诱导凋亡，或诱导免疫调节等；异质性也可以基于外泌体起源的组织，包括它们是否来自病细胞，瘤细胞产生的外泌体传递致瘤miRNAs明显促进瘤细胞增殖。外泌体在免疫调控、肉瘤转移和血管生成以及生物标志物等领域发挥着非常重要的作用。山东鼻腔灌洗液外泌体

细胞表面受体表达不同，外泌体对受体细胞的影响可能不同，可能诱导细胞存活，也可能诱导凋亡或免疫调节等。外泌体制备工艺

外泌体是具有双层脂膜的囊泡结构,其稳定性较好,可保护内部生物分子免受体液中各种酶的影响,从而保持其完整性和生物活性。外泌体被提取后一般悬浮于磷酸盐缓冲液。目前,常用的储存方法为冷冻保存,但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变,也可能导致多层囊泡的形成和聚集,反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。血清中包含外泌体在内的细胞外囊泡DNA在不同储存环境可保持稳定,血浆存放于4°C时其RNA会明显降解,在–20°C下长期保存也会导致血浆中外泌体总RNA降解,但miRNA却十分稳定,这也提示了外泌体miRNA作为生物标志物的潜力。外泌体制备工艺

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