如何检测外泌体分泌的多少

在免疫系统中，淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等均可以产生外泌体。研究表明免疫细胞来源的外泌体能够明显影响机体的免疫调节机制，包括调节抗原呈递、免疫激huo、免疫监督等。不同免疫细胞来源的外泌体功能不同，以树突状细胞(该细胞具有免疫刺激能力，是目前能够激huo初始T细胞的抗原递呈细胞)来源的外泌体为例，其外泌体的免疫刺激作用取决于来源细胞的成熟状态。成熟的树突状细胞外泌体内包含能够直接激huoT细胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和热激蛋白，这些分子使树突状细胞来源的外泌体具有抗原呈递、调节免疫响应的生物功能。以前无法用超速离心法提取的微囊泡，也通过运用PS亲和法实现高纯度提取。如何检测外泌体分泌的多少

细胞分泌外泌体的过程一般分为三个阶段:(1)质膜内陷,形成早期内吞小泡;(2)内吞小泡向内萌发成熟,形成多囊泡体;(3)多囊泡体与质膜融合,并释放出囊泡内容物,形成外泌体。外泌体具有独特的理化性质,其密度为1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的双层脂膜所包裹,具有典型杯状形态,呈现为扁平球形。外泌体表面富含多糖链,其质膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、胆固醇、神经酰胺和鞘磷脂构成,另有与细胞来源相关的部分特殊脂类。外泌体可携带蛋白质、核酸和脂质等生物活性大分子,其中主要为蛋白质,且大部分蛋白为所有来源外泌体所共有,只有小部分与其来源有关,为其分泌细胞的特有蛋白,能够反映分泌细胞的类型和生理病理状态。除此之外,外泌体可携带大量mRNA和miRNA等核酸,并将其运输到靶细胞,发挥相应的生物学功能。血浆提取试剂盒应用几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。

研究者利用电穿孔法对外泌体进行DOX的负载，进行体内抗中流效果的研究。实验结果显示，负载DOX的iRGD肽靶向性外泌体对中流的抑制效果远优于单纯的DOX。直接静脉注射DOX，其不仅水溶性低，而且容易使DOX与血液中的蛋白结合，从而被网状内皮系统识别捕获，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌体保护DOX，可以提高DOX水溶性，避免被网状内皮系统捕捉，提高靶向性，从而降低由于用药过量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。

外泌体（Exosome）是一种直径为30-100nm的纳米级脂质包裹体结构，内部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物质。外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，较后又可被其他细胞吞噬，是细胞间通讯的重要介质。源自于间充质干细胞内分泌的外泌体，富含一百多种胞外基质蛋白，mRNA信使核糖核酸和多重生长因子。在临床上，干细胞外泌体主要治理烧伤、烫伤、皮肤溃疡，再生健康皮肤；在护肤方面，主要是对外伤受损、衰老中毒皮肤进行修复，比较全的调理皮肤、改善肤质，令肌肤恢复年轻、健康的状态。蛋白质分子在外泌体信号传递过程中起到了非常重要的作用。

外泌体研究可以指导诊治肝损伤、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝脏疾病。药物诱导肝损伤（DILI）大鼠模型中，尿外泌体中的蛋白含量减少，包括CD26、CD81和其他潜在的标志物蛋白。而另一项研究则发现DILI大鼠血清中分离到的外泌体含有更高水平的蛋白，如HSP70、HSP90等。MSCs来源的外泌体可以诱导肝细胞增殖相关基因表达，减弱CCL4诱导的肝损伤。而酒精刺激会促进外泌体的分泌，miRNAs水平也会升高，并促进细胞因子的分泌，唤醒单核细胞的分化。尽管已取得上述成果，我们对外泌体的研究尚不够深入，外泌体在肝脏生理和病理中的重要作用及其临床应用仍有待继续探索。外泌体具有良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性，使其在药物递送方向大有潜力。脑脊液提取试剂盒方法

外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。如何检测外泌体分泌的多少

在Rameshwar等的研究中，采用转染间充质干细胞的方法，使外泌体载有anti-miR-9。在进行间充质细胞和多形性成角质细胞瘤(GBM)细胞间anti-miR-9传递的实验时，发现两种细胞不仅可以通过缝隙连接介导的细胞间通讯(GJIC)也可以通过外泌体传递anti-miR-9。且anti-miR-9降低两种GBM细胞(U87和T98G)对中流药物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌体传递的anti-miR-9实现，而非经GJIC传递的anti-miR-9，显示出外泌体在运载miRNA进行基因zhiliao时的潜力。利用外泌体进行GBM的zhiliao不只停留在体外细胞实验上，也已经有相关的体内zhiliao报道。如何检测外泌体分泌的多少