本发明涉及生物医药领域,涉及一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。背景技术:近年来,采用口腔拭子进行DNA检验有逐渐增多的趋势,由于国内没有专门用于采集口腔脱落细胞的工具,而只是使用普通的医用棉签,而不同的人采集口腔脱落细胞在擦拭次数、力度、检材剪取量及扩增用的模板量上都存在一定差异,导致了口腔拭子的DNA常温下保存效果不大稳定,影响了口腔拭子在DNA常温下保存中的应用。
为规范口腔拭子DNA的采集,提高口腔拭子的DNA保存效率,亟需一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。
口腔拭子的绒毛质地可采集更多目标分析物。样本口腔拭子供应商家

其是对于那些不能及时送检、放置时间过长的标本更有优势
①独有的喷射式植入尼龙纤维技术,增加标本的采集及释放量。
②拭子全长15cm,塑料杆上有独特的可折断设计。
③绒毛质地可采集更多目标分析物。
④没有标本残量,加快标本过程处理。
⑤拭子为独立包装,独立包装的无菌拭子。
方法/步骤:
①:准备好所需的材料,保证本身无感冒流鼻状态以免影响检查结果,撕开拭子采样包,握住手柄轻轻将取样拭子插入鼻腔处。
②:将深入鼻咽的拭子轻轻旋转取样拭子3-5圈,然后慢慢取出,注意轻拿轻放,不要用手或者其他物品去触碰拭子头部。
③:将提取出的样本放入样本采集管内,折断手柄,并封号样本采集管的盖子,保证密封,随机便完成取样。
产品细分:基因取样植绒棉签、口鼻腔采样拭子、DNA尼龙拭子采样棉签、一次性拭子无菌采样棉棒、植绒采样拭子、无菌采样棉签、一次性DNA基因采样拭子。 江苏鼻拭子口腔拭子批发将拭子伸进口腔,在口腔内壁来回挂拭多次,然后将拭子自然晾干,包装起来送往检测机构检测即可。

下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增,方法如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①:50℃,2min,循环1次。步骤②:95℃,5min,循环1次。步骤③:95℃15s,55℃30s(收集荧光),循环40次。结果分析:平行扩增的荧光定量PCR反应中,阴性对照无扩增,说明反应体系正常,无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本,然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测,结果如图1所示。
所有反应孔背景信号好、Ct值都在19~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型,说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测,每份样本平行三次,结果分别如图2、图3、图4、图5所示,由图可见,每个样本的平行实验,其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂(20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺),涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对,具体操作过程:将取血管颠倒混匀数次,吸取200μL血液于。口腔拭子在使用前一定要先检查包装是否破损,如果有破损的话记得不要使用哦。

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同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程:1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞,释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长,成本较高,步骤繁多,增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法,满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素:本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本,且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系,在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA,从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单,成本低廉,检测灵敏,且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。样本口腔拭子供应商家
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