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IdeS蛋白酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • A0-FR8-020等
  • 货号
  • A0-FR8-020
  • 中文描述
  • FabRICATOR
  • 规格
  • 2000U/5000U等
  • 级别
  • 研发级
  • 应用领域
  • 抗体酶切、抗体去糖基化、抗体偶联、蛋白质组学、聚糖图谱、亲和
IdeS蛋白酶企业商机

Genovis除了提供IdeS酶以外,还提供很多种特异性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1,产生完整的 Fab 和 Fc 片段的均质池。它在pH值和盐浓度范围内具有活性,不需要任何还原剂或辅助因子。因此,与许多其他常用的蛋白酶相比,FabALACTICA不需要任何优化来避免过度消化。这使得FabALACTICA成为一种有吸引力的酶,例如在还原和非还原条件下的LC-MS分析、抗体高阶结构(HOS)的结晶和NMR研究、双特异性或多特异性抗体的表征、单价结合研究和完整的Fc聚糖分析。如Thermo Scientific™ KingFisher™ ;在振动台上也能同样出色地工作。天津FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白组学

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大多数商业zhiliao性抗体属于IgG类,在Fc结构域中含有N-聚糖。一个重要的关键质量属性是糖基化曲线,因为它会影响稳定性、溶解度、药效学和药代动力学特性。这种翻译后修饰可能发生在生物工艺开发和制造过程中,因此需要密切监测。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶已成为一种被接受的快速表征单克隆抗体(mAb)的分析工具。FabRICATOR在铰链下方消化IgG,产生F(ab')2和Fc/2片段。单个FabRICATOR消解位点和质量谱的后续精度使Fc糖基化谱能够检测,从而可以监测批次间的一致性和其他关键质量属性。辽宁GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 18 kDa。

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用于IgA1和IgA2m1以上铰链消化的冻干酶。与IdeS不同,Genovis提供的IgASAPSub1+2在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1和IgA2m1,产生完整且均匀的Fab和Fc片段。由于人IgA1的铰链比IgA2的铰链长,因此IgA1和IgA2m1之间来自消化位点的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育时间为过夜(16-18小时),并且由于酶的特异性,没有过度消化的风险。该酶在pH值为6.0至8.0时具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可产生活性。活性为37°C。IgASAPSub1+2是从丹毒梭菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为131kDa。IgASAPSub1+2冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1和IgA2m1。

Blinatumomab(一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子)的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明,所有三个连接子区域均被消解,α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰,α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化,表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比,四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体,剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中,α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离,导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如,在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外,240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。可用于研究特定Fc区域的质量属性,有助于研究GS连接子的修饰。

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Genovis提供色谱柱形式的FabRICATOR(IdeS)酶,是在铰链下方对IgG进行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。酶解后,可以使用反相HPLC、质谱或其他分析方法分析片段。抗体消化和亚基生成的自动化使生物反应器的在线监测应用成为可能,例如,作为2D-LC-MS设置的一部分,将反应器直接耦合到MS。这种自动化的抗体亚基分析方法减少了操作人员的时间、样品处理时间并提高了通量。可精确定位特定的修饰。而无需肽图分析,可以较少的手动操作时间快速完成。湖北GingisKHANIdeS蛋白酶抗体酶切

在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1,产生完整的 Fab 和 Fc 片段。天津FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白组学

与IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析,从而促进IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具,可实现IgA的中级表征和质量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反应性;高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。天津FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白组学

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