山东GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

Genovis除了提供IdeS酶以外，还提供很多种特异性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1，产生完整的 Fab 和 Fc 片段的均质池。它在pH值和盐浓度范围内具有活性，不需要任何还原剂或辅助因子。因此，与许多其他常用的蛋白酶相比，FabALACTICA不需要任何优化来避免过度消化。这使得FabALACTICA成为一种有吸引力的酶，例如在还原和非还原条件下的LC-MS分析、抗体高阶结构（HOS）的结晶和NMR研究、双特异性或多特异性抗体的表征、单价结合研究和完整的Fc聚糖分析。IgMBRAZOR 是IgM 特异性蛋白酶。山东GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

Genovis提供冻干和固定化的FabRICATOR（IdeS），为客户提供了许多选择，以满足他们的需求。 冻干形式用于高度灵活的方法开发的目的，并随时准备使用，只需重组和添加到IgG样本。 冻干酶的灵活性也意味着它可以应用于更高的通量和自动化的工作流程。 Genovis还提供了在琼脂糖树脂上固定化的酶，在随时可用的旋转柱中，这可以极大限度地减少在样品中残留的酶，这可能是有利的。 对于更多的制备应用，我们提供FabRICATOR Fab2试剂盒，这是IgG片段生成和纯化的强大工具。 这包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc纯化柱，用于亚基的亲和纯化。 由于FabRICATOR在非还原条件下是活性的，F(ab’)2片段保留其链间和链内二硫键，如果片段想用于结合研究，这一点尤为重要，因为结合效率和免疫反应性将被保留。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学Genovis的FabRICATOR （IdeS蛋白酶）在30分钟内消化IgG，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。

与IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行中级分析，从而促进疫苗、zhiliao和诊断等过程中的IgM表征。独特-可实现IgM的中级表征和质量控制；快速–在30分钟内生成均匀的F（ab'）2和Fc片段；高度特异性–人IgM重链中的一个消化位点。IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分钟内完成，并且由于酶的特异性，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。该酶在pH值为5.5至9.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgMBRAZOR在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为38kDa。

与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。FabRICATOR（IdeS）酶是生物制药行业中普遍使用的工具。

Blinatumomab（一种对 CD19 和 T 细胞标志物 CD3 具有特异性的 BiTE 分子）的研究级生物仿制药在室温下用固定化过夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通过LC-MS对消解样品的直接分析表明，所有三个连接子区域均被消解，α-CD3 VL和VH链洗脱为一个色谱峰，α-CD19 VH和VL链作为单独的峰洗脱。来自连接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 结构域的小峰显示该短连接子未完全消化，表明 GlySERIAS 对短连接子的活性较低。与完整的蛋白质分析相比，四个结构域的分离提供了具有单同位素分辨率的高质量光谱。可以观察到每个结构域的几个不同变体，剩余的连接子残基数量不同。在色谱分离过程中，α-CD3 VH结构域无法从α-CD19 VH结构域完全基线分离，导致在相关质谱中观察到一些共洗脱。四个结构域的分离产生了有关在完整蛋白质水平上鉴定的蛋白质修饰位置的信息。例如，在完整水平上鉴定的 37 Da 的蛋白质修饰被分配给 α-CD3 VH 链。此外，240Da 和 320da 的两个修饰分别被分配给 α-CD3 VL 结构域。后者还含有一个带有五六个组氨酸残基的 His 标签。这些数据证明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 对包含多个柔性连接子蛋白进行质量控制的中级工作流程的强大功能。用于表征zhiliao用途的单克隆抗体、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制药。青海FabALACTICAIdeS蛋白酶

用FabDELLO消化市售的IgG1 risankizumab(在下铰链区域具有LALA突变)。山东GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

一些应用（如结合研究）具有高度灵敏度，因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此，Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速轻松地生成均质 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制备来自多种 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（对于兔 IgG，请咨询），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗，并通过 SDS-page 进行分析。首先，在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟，然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F（ab'）2 片段，并通过降低 pH 值，然后立即调整回中性 pH 值，一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时山东GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶