与肽图谱相比，根据Genovis科学家的经验，尤其是对于像抗体这样的分子，许多人在常规实验中做了太多的肽图谱，而中级水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中级方法（IdeS酶切抗体）需要更少的实际操作步骤和较少的示例处理，所有这些都意味着过程中出错的事情更少。我们的许多酶可以作为平台方法，同样的方法适用于绝大多数的抗体，这不是肽图的情况下，可能需要优化整个样品制备，LC分离，质谱设置和数据分析的每个不同的抗体分析。这些变化可能是很小的，但没有一种适用于所有肽图的方法。由于分析和数据分析的简单性，中级方法非常适合自动化和高通量的工作流程。肽图当然可以自动用于样品制备，但高通量肽图生成大量数据，仍然需要彻底分析。事实上，肽图谱是一个多步骤的过程，每一个步骤都可能破坏方法，并可能导致破坏蛋白质的人工制品，很难交叉训练给非专业人员。中级水平的方法很容易交叉训练，我们的方法在质量控制实验室中被成功地使用。肽图谱是一种用于修饰分析和氨基酸确认的方法，但一旦完成了这一工作，我相信使用中级分析可以成功地更有效地完成抗体样本的大部分工作。使用GlySERIAS固定化酶和内切糖苷酶GlycINATOR消化度拉糖肽。吉林FabDELLOIdeS蛋白酶
为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。江苏GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶度拉糖肽的使用GlySERIAS酶切后，HPLC分析后，还鉴定了GLP-1肽的氧化。
Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）与IdeS酶一样是特异性蛋白酶。在二维核磁共振波谱 （2D-NMR） 之后，可以通过 HOS 分析在精确的原子水平上评估 mAb 的关键质量属性。从Genovis的FabALACTICA Immobilized获得均相Fab和Fc片段的工作流程，是评估嵌合单克隆抗体英夫利昔单抗中HOS的理想选择，在海报“FabALACTICA产生纯和均相的mAb亚基，促进2D-NMR波谱分析”中进行了描述。来自生成的 Fab 和 Fc 片段的高质量信号和光谱分辨率导致能够观察 Fab 和 Fc 之间的结构变化、氧化和非氧化样品之间的差异，并通过观察原子分辨率来比较原研剂和生物仿制药的 HOS。
样品制备的条件可能会在样品中诱发伪影，因此需要避免高温和碱性pH值进行质谱分析。如果可能的话，避免多个步骤并在一锅反应中进行消化和还原也可能是有益的。与IdeS不同，为了探索Genovis的GingisREX对离液剂和去液剂的稳定性和耐受性，在一系列试剂中测试了酶活性，并使用底物测定进行了评估。数据显示，GingisREX在6M时耐受尿素，吐温高达1%，但活性在0.1%时受到SDC的负面影响。该酶在 pH 值范围为 5.0 至 9.0 时显示出活性，在 pH 值为 6.5-8.0 之间。综上所述，GingisREX可用于一锅反应，以同时消化和变性6M尿素。与Genovis的IdeS不同，双特异性 T 细胞接合器 （BiTE） 分子是一种融合蛋白疗法，其中两个 scFv 融合，形成一个双特异性分子，其中一个 scFv 靶向细胞毒性 T 细胞，另一个靶向Ai症抗原。该蛋白质由四个蛋白质结构域组成，两个 scFv 均由 VL 和 VH 区域组成，总共由三个柔性 GS 连接子连接。这种蛋白质的大尺寸（54 kDa）可能对通过完整质谱法进行产品质量监测构成挑战，因为标准MS仪器可能无法提供蛋白质的单同位素分辨率。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶将ADC（基于 IgG）消化成其亚基，用于表征这类复杂的药物。
与IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行中级分析，从而促进疫苗、zhiliao和诊断等过程中的IgM表征。独特-可实现IgM的中级表征和质量控制；快速–在30分钟内生成均匀的F（ab'）2和Fc片段；高度特异性–人IgM重链中的一个消化位点。IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶，可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM，产生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分钟内完成，并且由于酶的特异性，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。该酶在pH值为5.5至9.0时具有活性，不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgMBRAZOR在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为38kDa。Genovis将固定化酶固定在磁珠上，用于在铰链下方自动消化 IgG。青海FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
FabRICATOR MagIC磁珠含有Ides固定化酶专为自动化平台（振动台）而设计。吉林FabDELLOIdeS蛋白酶
当你应用像肽图这样的方法时，你可以从Genovis中级方法中获得的信息量就没有那么多了。一个主要的区别是你不能像在肽水平上那样将修改定位到单个氨基酸。然而，中级分析比肽图谱具有快速和简单的巨大优势，因为需要分析的色谱峰要少得多，数据处理任务要简单得多。此外，在中级实验中，手工实验步骤要少得多，FabALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要针对不同的人体IgG1进行优化。一旦在氨基酸水平上进行了PTM表征，我们非常认为中级表征肽图的一种补充方法，可以在更常规的基础上应用。中级分析更适用于高通量或监测类型的方法，并可用于支持肽图分析。吉林FabDELLOIdeS蛋白酶
与IdeS不同，在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中，详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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