大多数商业zhiliao性抗体属于IgG类,在Fc结构域中含有N-聚糖。一个重要的关键质量属性是糖基化曲线,因为它会影响稳定性、溶解度、药效学和药代动力学特性。这种翻译后修饰可能发生在生物工艺开发和制造过程中,因此需要密切监测。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶已成为一种被接受的快速表征单克隆抗体(mAb)的分析工具。FabRICATOR在铰链下方消化IgG,产生F(ab')2和Fc/2片段。单个FabRICATOR消解位点和质量谱的后续精度使Fc糖基化谱能够检测,从而可以监测批次间的一致性和其他关键质量属性。Genovis的FabDELLO酶在底物(包括LALA和LFLE突变的IgG1)上的有效性。云南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一种独特的酶,可在铰链区域下方的特定位点消化IgG,产生均匀的F(ab')2和Fc/2片段。除IgG外,没有其他底物是已知的。IgG在30分钟内消化,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。由于FabRICATOR在生理反应条件下消化IgG,因此保留了免疫反应性。在37°C下获得良好的活性,但也可以在室温下使用较长的反应时间进行消解。FabRICATOR可消化人类的所有亚类以及猴子、兔子和绵羊IgG的某些亚类。它对小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-为了消化这些抗体物种,我们建议使用FabRICATORZ。FabRICATOR是从化脓性链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为37725Da。FabRICATOR是IdeS的重组修饰形式,由GenovisAB开发,用于需要高标准和一致性的生物技术应用。有一种检测FabRICATOR酶的方法。了解有关山羊多克隆抗体Anti-FabRICATOR的更多信息。黑龙江IdeS蛋白酶抗体酶切在抗体药及核酸药领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。
与IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小时内完成,并且由于酶的特异性,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。该酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。活性是在37°C下,但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgASAPSub1是从口腔链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为148kDa。IgASAPSub1冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。
不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一种蛋白酶,可在铰链上方的单个位点消化人 IgG1,在两小时内产生完整的 Fab 和 Fc 片段,无需还原条件。该酶对具有突变铰链区域的抗体(如 LALA 突变)具有活性,并启用中级 LC-MS 来表征具有突变铰链的抗体的关键质量属性。FabDELLO 在铰链上方的单个位点消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单个消化位点是人 IgG1 的三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。FabDELLO在天然条件下具有活性,需要钙离子的存在。在37°C和pH 7-8.5下获得良好活性。FabDELLO 是从 Bdellovibrio 细菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 32 kDa。IgASAP Sub1+2 在脯氨酸 (P) 和缬氨酸 (V) 之间消化 IgA1 和 IgA2m1。
与IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一种半胱氨酸蛋白酶,可在铰链上方的单个位点(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性,并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂(2mM半胱氨酸)与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物,研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应,并鉴定翻译后修饰。IgASAP Sub1 的消化位点位于该扩展区域,使IgASAP酶具有 IgA1 特异性。陕西FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学
Genovis将半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性琼脂糖珠上,现在称为FabRICATOR MagIC。云南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切
大多数zhiliao抗体携带人 IgG1 骨架,双特异性或多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性,例如单价结合、二硫键扰乱和配对 Fc 糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,这需要优化以大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgG1,以产生完整的 Fab 和 Fc 片段。该酶在大多数人IgG1 上也具有活性,其中铰链区域以下的突变已被引入。为了证明FabALACTICA的性能,我们消化了不同的人IgG1抗体,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后观察到的定义峰显示了不同人IgG1抗体的均质片段生成和强大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。云南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切
与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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