在Genovis,我们的策略是帮助客户进行中级(或亚基)分析,这是我们的工作,特别是我们的蛋白质酶切产品。完整质量和肽图谱是蛋白质表征的常用方法,我们发现,与简单但信息有限的完整质量和高度复杂但信息丰富的肽图谱相比,中级方法具有优势。通过执行中级描述,您可以生成从完整的质量实验中获得的所有信息,具有额外的优势。在对抗体进行完整质量分析时,很难明确地识别某些修饰。质谱仪器正在改进,可以更有效地分析更大的分子,但通过使用我们的SmartEnzymes,如IdeS,可以将抗体分解成更小的片段,这提高了这些实验可以执行的分辨率,因此,增加了鉴定修饰的信心。此外,你不仅能够更好地识别修改,而且你能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域,这是你在完整水平上无法做到的。Genovis提供FabRICATOR Fab2试剂盒,这是IgG片段生成和纯化的强大工具。云南GingisREXIdeS蛋白酶
Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人类亚类以及人源化和嵌合 IgG。该酶对其他物种的 IgG 也有活性,包括来自大鼠、猴子、兔子和绵羊的某些类别的 IgG。因此,FabRICATOR的高特异性在某些情况下会使其对铰链区域的突变敏感,并损害酶活性。来自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,与 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化这些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在铰链下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。对于这种抗体种类,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 试剂盒可用于制备 Fab 片段。云南GingisREXIdeS蛋白酶可用于如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化等。
用于IgA1和IgA2m1以上铰链消化的冻干酶。与IdeS不同,Genovis提供的IgASAPSub1+2在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1和IgA2m1,产生完整且均匀的Fab和Fc片段。由于人IgA1的铰链比IgA2的铰链长,因此IgA1和IgA2m1之间来自消化位点的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育时间为过夜(16-18小时),并且由于酶的特异性,没有过度消化的风险。该酶在pH值为6.0至8.0时具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可产生活性。活性为37°C。IgASAPSub1+2是从丹毒梭菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为131kDa。IgASAPSub1+2冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1和IgA2m1。
与IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析,从而促进IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具,可实现IgA的中级表征和质量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反应性;高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。Genovis的IdeS蛋白酶是IgG特异性半胱氨酸蛋白酶。
一些应用(如结合研究)具有高度灵敏度,因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此,Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速轻松地生成均质 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制备来自多种 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(对于兔 IgG,请咨询),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗,并通过 SDS-page 进行分析。首先,在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟,然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F(ab')2 片段,并通过降低 pH 值,然后立即调整回中性 pH 值,一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时Genovis的GingisREX (RgpB)可用于肽图分析、从头肽测序和翻译后修饰分析;产生更长的肽 - 提高序列覆盖率。黑龙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis的FabRICATOR (IdeS蛋白酶)在30分钟内消化IgG,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。云南GingisREXIdeS蛋白酶
与IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一种独特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接头。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性,又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。为了改善连接子的去除,Genovis建议使用GlySERIASImmobilized。对于连接子表征,我们推荐GlySERIAS冻干。具有柔性接头的独特酶消化融合蛋白;中级方法可降低融合蛋白表征的复杂性;复杂融合蛋白的可靠且可重复的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基的重复序列组成的柔性连接子。该酶在天然反应条件下具有活性,能够对复杂的融合蛋白进行中级表征。连接子区域同时在多个位点被消化,导致先前连接的组分分离。活性发生在pH7.6下,孵育时间可以根据所需的产物而变化。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为18kDa。云南GingisREXIdeS蛋白酶
与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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