如果您想分析单克隆抗体或单克隆抗体分子,现在有了Genovis的一些新产品(IgA酶,IgM酶),其他的模式和分子形式(IdeS高通量的产品形式)来测定和监测许多不同的CQA,Genovis可以缓解使用不同分析方法时可能出现的瓶颈。 生产大量的样品当然很好,但如果分析团队不能足够快地处理它们,那就没有什么意义了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法,当然这些方法要快速,而且可能易于自动化。 这正是我们所能提供的,这使Genovis能够支持更多不同功能的客户。工艺开发和潜在生物制药稳定性研究相关的大量样品。北京IdeS蛋白酶抗体酶切
与IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一种独特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接头。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性,又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。为了改善连接子的去除,Genovis建议使用GlySERIASImmobilized。对于连接子表征,我们推荐GlySERIAS冻干。具有柔性接头的独特酶消化融合蛋白;中级方法可降低融合蛋白表征的复杂性;复杂融合蛋白的可靠且可重复的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基的重复序列组成的柔性连接子。该酶在天然反应条件下具有活性,能够对复杂的融合蛋白进行中级表征。连接子区域同时在多个位点被消化,导致先前连接的组分分离。活性发生在pH7.6下,孵育时间可以根据所需的产物而变化。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为18kDa。福建FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白组学IgASAP Sub1 的消化位点位于该扩展区域,使IgASAP酶具有 IgA1 特异性。
Genovis酶的适应性和更高的通量和自动化工作流程的中级方法,这是非常重要的。 随着分析方法和仪器的改进,在表征实验室中有更大的能力进行更多类型的分析,或者在工艺开发或QC实验室中有更先进的分析仪器。 当涉及到能够支持大量样本分析的活动时,例如克隆筛选,工艺开发和验证以及稳定性研究,这是非常好的。 此外,Genovis产品的效率、健壮性(Robust)和易用性使它们更容易应用于这些类型的工作,而且,也适用于受控环境中的批次放行方法。Genovis的产品很好地支持这种类型的工作,这也促使Genovis不断推出新产品和现有产品的不同形式,以支持客户的工作。
为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR(IdeS)。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上,您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段,这一速度简化了方法开发,并允许快速有效的中层表征,使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容(更多信息)。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵,pH7,结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而,缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC(IdeS)色谱柱上的保留,并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。由于 GingisKHAN 的特异性消化依赖于 IgG 的天然折叠,因此在变性条件下,还可能出现其他消化位点。
与IdeS不同,度拉糖肽由两个胰高xue糖素样肽-1 (GLP-1) 分子组成,它们通过柔性 GS 接头连接到人 IgG4 的 Fc 区域。为了分别研究肽和 Fc 区域,从而鉴定结构域特异性 PTM,用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下冻干消化度拉糖肽 1 小时。为了降低样品复杂性,使用内切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT还原链间二硫键。反相LC-MS对样品的分析表明,使用GlySERIAS进行连接子消化后,肽从Fc区域完全去除。连接子中的大量甘氨酸残基为GlySERIAS提供了许多不同的潜在消化位点,这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体,其中不同数量的甘氨酸和丝氨酸残基仍然连接。此外,还鉴定了GLP-1肽的氧化。尽管GlySERIAS同时在多个位点进行消化,但一式三份的酶解在获得的不同Fc/2变体的相对量中显示出可重复的结果。为了降低度拉糖肽复杂性,使用GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT还原链间二硫键。福建FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白组学
这正是您使用FabRICATOR(IdeS蛋白酶)可以得到的。北京IdeS蛋白酶抗体酶切
不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一种蛋白酶,可在铰链上方的单个位点消化人 IgG1,在两小时内产生完整的 Fab 和 Fc 片段,无需还原条件。该酶对具有突变铰链区域的抗体(如 LALA 突变)具有活性,并启用中级 LC-MS 来表征具有突变铰链的抗体的关键质量属性。FabDELLO 在铰链上方的单个位点消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单个消化位点是人 IgG1 的三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。FabDELLO在天然条件下具有活性,需要钙离子的存在。在37°C和pH 7-8.5下获得良好活性。FabDELLO 是从 Bdellovibrio 细菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 32 kDa。北京IdeS蛋白酶抗体酶切
与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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