一些应用（如结合研究）具有高度灵敏度，因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此，Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速轻松地生成均质 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制备来自多种 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（对于兔 IgG，请咨询），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗，并通过 SDS-page 进行分析。首先，在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟，然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F（ab'）2 片段，并通过降低 pH 值，然后立即调整回中性 pH 值，一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时例如氧化、糖基化等翻译后修饰，可以用IdeS酶。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学
LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰（PTM）的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱，可快速进行单克隆抗体的柱上酶切，并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在铰链下方快速且特异性地消化IgG，产生F（ab'）2和Fc片段，而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案，FabRICATOR被共价固定在树脂上，并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱，只需稍作修改，即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后，FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相（RP）色谱柱的柱头上。GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白组学可用于研究特定Fc区域的质量属性，有助于研究GS连接子的修饰。
大多数zhiliao抗体携带人 IgG1 骨架，双特异性或多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对 Fc 糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化，这需要优化以大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE） 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgG1，以产生完整的 Fab 和 Fc 片段。该酶在大多数人IgG1 上也具有活性，其中铰链区域以下的突变已被引入。为了证明FabALACTICA的性能，我们消化了不同的人IgG1抗体，并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后观察到的定义峰显示了不同人IgG1抗体的均质片段生成和强大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。
Genovis将固定化酶固定在磁珠上，用于在铰链下方自动消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。这些微球能够在中级表征工作流程中并行快速自动酶解多种抗体。它们专为自动化平台而设计，但在无法实现自动化的情况下，在振动台上的表现同样出色。酶切消解后，样品可直接转移到LC-MS的自动进样器进行快速色谱分析，或转移到其他分析方法进行分析。自动平行抗体酶切和亚基生成允许处理与克隆选择、工艺开发和潜在生物制药稳定性研究相关的大量样品。自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险，并提高通量。Genovis还提供了在琼脂糖树脂上固定化的酶，在随时可用的离心柱中，这可以大限度地减少在样品中残留的酶。
对于携带突变铰链的 Fc 融合蛋白或抗体来说，Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑战性。Genovis的GingisKHAN酶在铰链上方一个可触及的赖氨酸位点消化人IgG1，在足够温和的还原条件下保留链内和链间二硫键，从而产生完整的Fab和Fc片段。对于融合蛋白，消化通常在铰链上方获得，但融合伴侣的结构和氨基酸序列可能导致其他暴露的消化位点。如果去除保守的 Fc N-聚糖，Fc 中的第二个切割位点也可能被GingisKHAN酶切。将精选的单克隆人 IgG1 抗体和 Fc 融合蛋白与 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小时，并通过 HPLC 进行分析。Genovis的FabULOUS （SpeB） 是一种半胱氨酸蛋白酶。北京FabDELLOIdeS蛋白酶抗体酶切
可用于抗体高阶结构（HOS）结晶和NMR研究、双抗或多抗的表征、单价结合研究或完整Fc聚糖分析。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学
大多数zhiliao性抗体都携带人IgG1骨架，双特异性和多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，这需要优化以极大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的FabDELLO与IdeS酶具有不同的特异性，它在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并产生完整的Fab和Fc片段。为了证明FabDELLO的特异性活性，通过非还原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的选择。所有底物均实现了完全消化，包括具有其他困难的LALA和LFLE突变的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精确和有效性能验证了其在生物制药开发中的用途。福建GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白组学
