免疫组化实验注意事项总结:
Ø本实验室所用切片一般是石蜡切片。
Ø烘片:使蜡片水分蒸发,石蜡软化,组织切片牢固贴在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差异。
Ø抗原修复时,使片子始终浸没在修复液中,液体不能干。
Ø一抗孵育在37度培养箱,湿盒放置1h,省时间和结合效果好,不要超过1h,容易过染。
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Ø二抗使用:两个二抗放大信号或一个二抗;若抗体信号强,可不用放大信号,尽量增大信噪比。
Ø10XDAB在常温溶解,尽可能现用现配,放于4度储存时间久了效果不佳。
Ø复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用,要区分开。
Ø加抗体和显色液时,都要将片子甩干,在半干半湿的状态下再加,不然容易造成溶液的二次稀释。
Ø整个操作过程中在显色之前,一定不能干片。 关于免疫组化,你想知道的都在这里!内蒙古做得好的免疫组化怎么样
免疫组化中免疫胶体金技术,英瀚斯生物小编为您说明介绍。免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。内蒙古做得好的免疫组化怎么样做好免疫组化,你需要了解这些!
免疫组化在在病理诊断中,随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现,免疫组化在cancer诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。由于免疫组化技术也存在一些局限性,因此,深入研究免疫组化原理和技术,并努力实现规范化的操作,才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床医疗中的作用。
观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况,对抗原进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学,由于抗原与抗体特异性结合,因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂(酶、荧光素、同位素、金属离子等等)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本,其中制作组织标本更常用、更基本的方法是石蜡切片。石蜡切片对于组织形态保存好,有利于各种染色对照观察,而且能长期保存;石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先选择的组织标本制作方法。
英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h,脱蜡至水,用PBS冲洗三次,每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复,中火至沸后断电,间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封闭20min(封闭电荷)。
6、去除BSA液,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜。
7、PBS洗3次,每次5min。
8、去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。
9、PBS洗3次,每次5min。
10、去除PBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色。
11、显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化(1s),自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精(70-100%)10min一个梯度,脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固。 英瀚斯生物免疫组化,高效高质量出结果。
免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源,IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化,要么通过固定过程,要么是单独的透化步骤,这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤,这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理,才能进行抗体染色。一旦处理好样品,IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然,就染色而言,根据所使用的抗体来优化还是少不了的。英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南!浙江做得好的免疫组化怎么样
英瀚斯生物实验外包,多种病理染色熟练掌握,可做免疫组化!内蒙古做得好的免疫组化怎么样
免疫组化原理及实验步骤——实验外包。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第1抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物,将抗原放大,由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。内蒙古做得好的免疫组化怎么样