我用的是3500g,4度离心,时间可以自己控制,取决于你之后的浓缩体积,我一般是200ul左右。千万别一下离心时间太长,不同的蛋白浓缩的速度不同,有的需要长时间离心,有的则一下子就好。当然也和你的蛋白是否比较纯,所用的是什么buffer,还有蛋白的浓度有关系。所以离心时要先短些时间观察一下你的浓缩速度,不要一下子浓缩过了,甚至形成沉淀就得不偿失了。另外其实他们的管子都设计的是一次性使用,所以如果想重复使用,不要离得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重复使用时要看看管壁上有没有裂纹,现在的管子好像不如从前的结实了。超滤离心管可以通过配合其他实验室设备使用,如高速冷冻机、凝胶电泳仪等来达到更好的效果。广州30K超滤离心管品牌
超滤离心管的分子量选择:按照样品量和目标分子量选择适当的超滤离心管,为了得到较高的收率,所选滤膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大小的1/3左右,不超过目标分子量的一半。因为超滤膜上孔径是平均孔径,膜上的孔并非均匀,离心高压下也可能渗漏,因此截留孔径越小,流速越慢但截留比例更大。如果样本浓度低体积大,可选择较小容积的超滤管多次重复加样离心。如果同时需要脱盐和去除可溶小分子杂质,可将待浓缩样品稀释到超滤管较大容积再离心,重复2次可除去99%盐。避免过长时间或者过速离心,虽然优良品质的产品都有防死端设计,可避免过度离心造成膜表面干而造成不可逆吸附。广州30K超滤离心管品牌超滤离心管还可用于制备DNA文库或RNA文库,以进行基因克隆和功能研究。
超滤离心管使用注意事项:当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。
超滤离心管可以灭菌吗?1. 超滤离心管使用75%的乙醇消毒。2. 不能121℃灭菌,否则会变形,不论是是密理博、颇尔还是赛多利斯的都不能。3. 超滤管应当干燥保存,买回来的时候就是干的。当然也可以湿润保存,但是应当保存在20%的乙醇中,是为了防止没洗去的残留的液体长菌堵膜。4. 有人说湿润保存不能干,指的是卷式和板式超滤膜。离心管是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。超滤离心管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品。超滤离心管也可用于血清学检测和诊断,以确定人类或动物体内某些抗体的存在与否。
超滤离心管使用的是再生纤维素膜,这种材质是蛋白吸附较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白,它们和膜的非特异吸附可能会增强,对于这种情况,可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理,也可以尝试换成Amicon Ultra0.5或2来进行实验,通过减小膜面积来降低非特异性吸附。超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析,可用缓冲液或Milli-Q水预清洗。如果干扰仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用缓冲液或Milli-Q水再次清洗后甩干。超滤离心管还可以用于提取DNA、RNA等核酸分子,并在基因工程和生物技术中发挥重要作用。广州30K超滤离心管品牌
超滤离心管可用于分离和纯化各种大分子化合物,如蛋白质、核酸、多糖等。广州30K超滤离心管品牌
超滤离心管从细胞培养上清液中浓缩蛋白,在园子里找到一些关于浓缩蛋白的一些帖子,但还有些问题还是向园子里的大虾请教一下。我们定的是 15ml规格的管子,不知道有没有谁以前做过的,有关于转速,时间给一些建议,另外细胞上清液离心前是否需要什么预处理?离心之后回收蛋白时怎么尽量减少损失?如果要把管子重复利用,NaoH清洗后,如何在20%的乙醇中保存?是将其浸到乙醇中防于4度,还是在管子中灌入乙醇?我用过5ml的管子,当时使用的转速是4000rpm 8min,可以把5ml的样品液浓缩到约200ul,这只供参考,具体情况还要由您的样品决定。我保存5ml管子的方法是把内管取出,浸泡于装有20%乙醇的烧杯中。四度保存。广州30K超滤离心管品牌