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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。
RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可以通过分离纯化,对这些复合物中的RNA进行检测,如qPCR验证或测序分析。
表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注增加。RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展,使研究人员能够定位 RNA-蛋白质相互作用。
免疫沉淀抗体的选择?广州ChIP免疫沉淀磁珠原理

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RIP实验步骤通常包括:
1. 细胞收集与交联:培养细胞至适当密度。使用交联剂(如甲醛)进行交联,以固定蛋白质-RNA复合物。
2. 细胞裂解:收集细胞并进行裂解,释放RNA-蛋白质复合物。在裂解过程中添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。
3. 超声处理:使用超声波破坏细胞,获得更小的染色质片段,这有助于后续步骤中抗体的接触。
4. 除去细胞碎片:通过离心去除细胞碎片和未裂解的细胞,收集含RNA-蛋白质复合物的上清液。
5. 免疫沉淀:将针对特定RNA结合蛋白(RBP)的抗体加入到上清液中。孵育一段时间,使抗体与目标蛋白充分结合。
6. 捕获免疫复合物:添加蛋白A或蛋白G结合的磁珠或琼脂糖珠。孵育使抗体-蛋白质-RNA复合物与珠子结合。
7. 洗涤:多次洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。
8. 洗脱与逆转交联:使用适当的缓冲液洗脱免疫复合物。使用蛋白酶K处理样品以逆转交联,释放RNA。
9. RNA提取与纯化:从免疫沉淀样品中提取RNA,并进行纯化。
10. RNA分析:使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA,以确定与目标蛋白相互作用的RNA种类。
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免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和蛋白质特性的重要方法。它具有一些明显的优点,但也存在一些局限性。
优点:
1. 特异性强:IP技术利用特异性抗体对目标蛋白进行捕获,因此具有很高的特异性。
2. 富集低丰度蛋白:可以从小量样本中富集低丰度的目标蛋白,有助于研究稀有蛋白。
3. 研究蛋白质相互作用:通过Co-IP等变体技术,可以研究蛋白质之间的相互作用。
4. 操作简便:IP实验步骤相对简单,容易在实验室中实施。

缺点:
1. 对抗体质量依赖性高:需要高质量的特异性抗体,否则可能导致假阳性或实验失败。
2. 存在非特异性结合:样本中的其他蛋白质可能非特异性地结合到抗体或固相载体上。
3. 可能破坏蛋白质的天然构象:裂解和洗涤步骤可能破坏蛋白质的天然结构,影响其功能。
4. 可能存在背景噪声:非特异性结合可能导致背景噪声,影响结果的清晰度和解释。

    免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性,将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一种在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理非常简单,如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话,那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时,另一个蛋白也会被同时沉淀下来。与酵母双杂交技术不同,免疫共沉淀技术所利用的是抗原和抗体间的免疫反应,是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用的方法。 免疫沉淀技术是什么?

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免疫沉淀IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术ChIP的应用有哪些?IP免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀技术的实验方法。广州ChIP免疫沉淀磁珠原理

染色质免疫共沉淀(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)技术是目前公认的研究此相互作用的选择,是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下,固定蛋白质-DNA(染色质)复合物,并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法(抗体亲和)沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的 DNA,通过对目的片段的纯化与后期检测,从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
这项技术通过蛋白质与DNA互作来分析目标基因活性以及已知蛋白质的靶基因,被广泛应用于体内转录调控因子与靶基因启动子上特异核苷酸序列结合方面的研究。该技术常与DNA芯片和分子克隆技术相结合。
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世途科生物简介:

上海世途科生物科技有限公司是一家集研发、生产、销售于一体的,为全球用户提供生物试剂的生命科学企业。世途科生物(CYTOCH)汇集了一支由海内外KOL组成的研发团队,他们在生物和化学领域拥有相当丰富的研发经验,通过将化学与生物技术相结合,致力于现有技术难点突破、新技术研究,为相关科学研究者提供思路和解决办法。

凭借着强大的研发实力和严谨的质量管理,通过产学研合作,加快客户科研成果的转化,不断推动行业的发展。

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anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠哪个公司好用 2024-11-27

通过离心等方法,可以将这些免疫复合物从样本中分离出来,从而获得纯净的目标蛋白。蛋白免疫沉淀在生命科学研究中有着普遍而重要的应用。在蛋白质相互作用研究方面,它可以帮助科学家们确定不同蛋白质之间的结合关系。通过免疫沉淀一个已知的蛋白质,然后分析与之结合的其他蛋白质,就能够构建起蛋白质相互作用网络,深入了解细胞内各种生理过程的调控机制。在疾病研究中,蛋白免疫沉淀也发挥着关键作用。例如,通过检测患者样本中特定蛋白质的表达水平和修饰状态,可以为疾病的诊断和医疗提供重要线索。Co-IP 的高特异性使其在免疫研究中备受青睐,能准确获取相关蛋白信息。anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠哪个公司好用同时,对于...

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