异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC):FITC是应用*为***的一种荧光素,经激光激发后发出明亮的黄绿色荧光,*大发射波长为525nm。FITC的荧光强度受PH影响较大,常随着PH的降低而减弱,因此,在使用FITC时需格外注意溶液的酸碱度。a)电泳分离后的蛋白质检测(b)蛋白质和肽的微测序分析(c)使用毛细管区带电泳进行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟踪和检测(e)细胞和组织切片中的抗原检测(f)通过标记DNA片段进行细胞凋亡检测除了因其在水中的溶解性而易于用于偶联物制备外,异硫氰酸荧光素还具有明亮的荧光(由于偶联后的大消光系数和高量子产率),使其成为许多工艺的优先染料。在流式细胞术和免疫荧光显微术中,染料与各种抗体(一抗或二抗)结合,以检查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在肾功能中的作用等状态。作为荧光素的衍生物,异硫氰酸荧光素含有一个异硫氰酸酯反应基团,这有助于其对通常存在于生物分子中的动漫和巯基基团具有反应性。D-荧光素钾盐荧光染料。辽宁合肥荧光染料
绿色荧光染料ICG的主要作用吲哚菁绿(IndocyanineGreen,简称ICG)是一种广泛应用于医学和生物领域的荧光染料。它具有独特的化学结构和性质,因此被***用于荧光显像、光热***、生物识别和药物输送等领域。吲哚菁绿的绿色溶解度是其在水中的溶解度,它是衡量该染料在溶液中的溶解能力的重要指标。吲哚菁绿具有较好的水溶性,可以在水中迅速溶解,形成稳定的溶液。这一特性使得吲哚菁绿在医学诊断和***中得到广泛应用。吲哚菁绿的主要作用之一是在医学影像学中作为造影剂。由于其具有强烈的荧光特性,能够在近红外光谱范围内吸收和发射光线,因此被***用于近红外荧光显像技术中。在临床中,医生可以通过注射吲哚菁绿溶液,利用近红外光源对患者进行显像,以观察和评估病变部位的血液灌注情况、淋巴引流途径等。这为医生提供了非侵入性、实时性的影像信息,有助于准确诊断和指导***。此外,吲哚菁绿还在光热***中发挥着重要作用。光热***是一种利用光热效应杀灭肿瘤细胞的方法。吲哚菁绿可以吸收近红外光并将其转化为热能,从而使附近的肿瘤细胞受热破坏。这项技术在*****中具有巨大潜力,因为它可以实现高度精细的***,同时比较大限度地减少对周围正常组织的损伤。西藏微泡荧光染料异硫氰酸荧光素含有一个异硫氰酸酯反应基团这有助于其对通常存在于生物分子中的动漫和巯基基团具有反应性。
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料,具有广泛的应用,作为抗体和其他探针标记,用荧光显微镜,流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性,是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质(特别是抗体)的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物,以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。
3.粘壁细胞的染色(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。(4)在37℃培养细胞2~20分钟,不同的细胞比较好培养时间不同。(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,培养5~10分钟,然后吸干培养基。
4.显微镜检测(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。(2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:a)DiI和DiO=OmegaXF52,Chroma51004;b)DiI和DiD=OmegaXF92,Chroma51007;c)DiI,DiO和DiD=OmegaXF93,Chroma61005
5.流式细胞仪的检测DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染色的细胞可以分别用经典的FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测。 Cy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右。
异硫氰酸荧光素(FITC)是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。在495/517nm处,该染料会产生激发/发射峰值,并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合,该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合。而它的基本成分——荧光素,其摩尔质量为332g/mol,常被用作荧光示踪剂。FITC(389g/mol)是用于荧光显微镜技术的首批染料,且其被当成AlexaFluor®488等后续荧光染料的发端。该染料的荧光活性取决于它的大共轭芳香电子系统,而该系统受蓝色光谱中的光所激发。经常与FITC同时使用的另一种染料是与其相似的TRITC[四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸]。与FITC相反,TRITC并非荧光素,而是罗丹明家族的衍生物。罗丹明也具有一个大的共轭芳香电子系统,正是该系统引发了它们的荧光行为。还有一点与FITC相反,TRITC(479g/mol)由比较**长为550nm的绿色光谱中的光所激发,它的比较大发射波长为573nm。与蛋白质(例如,抗体)结合也基于异硫氰酸盐反应基团。D-荧光素钾盐小动物成像。吉林免疫组化荧光染料
荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。辽宁合肥荧光染料
一、体外生物发光试验荧光素试剂的制备:D-荧光素,钾盐,无菌纯水,完全培养基(自行配置)1、用无菌水制备100X荧光素原液(15mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2、将D-luciferin,potassiumsalt溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150μg/ml的工作液。用组织培养基1∶100稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)3、去除培养细胞的培养基图像分析前,向细胞培养板中添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析-注射器滤膜过滤除菌,0.2μm注:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。辽宁合肥荧光染料