电压钳的缺点:目前电压钳技术主要用于研究巨火细胞的全细胞电流,特别是在分子克隆卵母细胞表达电流的鉴定中,发挥着不可替代的作用。然而,它也有其致命的弱点:1。微电极需要刺穿细胞膜进入细胞,导致细胞质丢失,破坏细胞生理功能的完整性;2、不能确定单通道电流。由于电压钳位薄膜面积大,包含大量随机开关的通道,背景噪声大,往往会掩盖单通道的电流。3.在小细胞(如直径10-30μm的哺乳动物细胞)上进行电压钳实验,技术难度更大。因为电极需要插入到细胞中,所以微电极的前端必须做得非常薄。如此薄的前端导致电极阻抗较大,往往为60~-80mω或120~150MΩ(视灌注液不同而定)。如此大的电极阻抗,不利于用细胞内电流钳或电压钳记录时,短时间(0.1μs)内将电流注入细胞,从而达到钳制膜电压或膜电流的目的。此外,插在小电池上的两个电极会产生电容并降低电压测量电极的反应能力。由于电极前列与细胞膜的高阻封接,在电极前列笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离。可升级膜片钳系统

膜片钳技术的创立取代了电压钳技术,是细胞电生理研究的一个飞跃,使得离子通道的研究,从宏观深入到微观,使昔日的“肉汤生理学(brothphysiology)”与“闪电生理学(lightningphysiology)”在分子水平上结合起来,使人们对膜通道的认识耳目一新。当前,生理学、生物物理学、生物化学、分子生物学和药理学等多种学科正在把膜片钳技术和膜通道蛋白重组技术、同位素示踪技术和光谱技术等非电生理技术结合起来,协同对离子通道进行较全的研究。不少实验室已经将基因工程与膜片钳技术结合起来,把通道蛋白有目的地重组于人工膜中进行研究。设想将合成的通道蛋白分子接种入机体以替换有缺陷和异常的通道的功能而达到的目的。单通道膜片钳高阻抗封接这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动的技术。

离子选择性(selectivity)(大小和电荷)∶某一种离子只能通过与其相应的通道跨膜扩散(安静∶K>Na100倍、兴奋;Na>K10-20倍);各离子通道在不同状态下,对相应离子的通透性不同。门控特性(Gating)∶失活状态不仅是通道处于关闭状态,而且只有在经过一个额外刺激使通道从失活关闭状态进入静息关闭状态后,通道才能再度接受外界刺激而***开放。离子通道的功能(FunctionoflonChannels)1.产生细胞生物电现象,与细胞兴奋性相关。2.神经递质的释放、腺体的分泌、肌肉的运动、学习和记忆3.维持细胞正常形态和功能完整性膜离子通道的基因变异及功能障碍与许多疾病有关,某些先天性与后天获得性疾病是离子通道基因缺陷与功能改变的结果,称为离子通道病(ionchannelpathies)。
膜片钳技术的建立。抛光并填充玻璃管微电极,并将其固定在电极支架中。2.通过与电极支架连接的导管向微电极施加压力,直到电极浸入记录槽溶液中。3.当电极浸入溶液中时,给电极一个测量脉冲(命令电压,如5-10ms,10mV)读取电流,根据欧姆定律计算电阻。4.通过膜片钳放大器的控制键将微电极前端的连接电位调至零。这种电势差是由电极中的填充溶液和浸浴之间的不同离子成分的迁移引起的。5.用显微操作器将微电极前缘靠近直视下待记录的细胞表面,观察电流的变化,直至阻抗达到1gω以上,形成“干封”6。将静息膜电位调整到预期的钳制电压水平,这样当细胞没有钳制到零时,放大器可以从“搜索”变为“电压钳制”。一些学者建立了组织切片膜片钳技术(Slicepatch),就能在哺乳动物脑片制备上做全细胞记录。

电压钳的原理∶用两根前列直径0.5um的电极插入细胞内,一根电极用作记录电极以记录跨膜电位,用另一根电极作为电流注入电极,以固定膜电位。从而实现固定膜电位的同时记录膜电流。电位记录电极引导的膜电位(Vm)输入电压钳放大器的负输入端,而人为控制的指令电位(Vc)输入正输入端,放大器的正负输入端子等电位,向正输入端子施加指令电位(Vc)时,经过短路负端子可使膜片等电较,即Vm=Vc,从而达到电位钳制的目的,并可维持一定的时间。Vc的不同变化将导致Vm的变化,从而引起细胞膜上电压依赖性离子通道的开放,通道开放引起的离子流反过来又引起Vm的变化,致使Vm≠Vc,Vc与Vm的任何差值都会导致放大器有电压输出,将相反极性的电流注入细胞,以使Vc=Vm,注入电流的大小与跨膜离子流相等,但方向相反。因而注入的电流被认为是标本兴奋时的跨膜电流值(通道电流)。微电极的制备膜片钳电极是用外径为1-2mm的毛细玻璃管拉制成的。膜片钳价格
膜片钳通常由两个平行的、弯曲的钳臂组成,钳臂的末端有一对夹持垫,可以夹住薄片材料。可升级膜片钳系统
现在这块全新的芯片被放置在了跟前置放大器大小类似的小盒子中,便成就了这款全球较小的膜片钳放大器ePatch。体积大幅缩减只是一个表面,由于细胞电信号在被电极记录到后,直接进入了芯片,以较短的路径直接从模拟信号转变成了数字信号,在很大程度上减少了环境及电路噪音对信号的影响,所以这款放大器便可以轻易获取非常高质量且稳定的电生理信号。ePatch体积只为42*18*78mm,重量200g,整套设备的大小只相当于传统膜片钳设备的前置放大器,可以轻松地放入衣服口袋。用USB接口连接电脑后即可使用,无需额外电源,连接和使用都极为简便。没有了占地方的放大器,数模转换器以及相互连接的众多电线,电源线等等,我们的膜片钳又进一步减小了体积。可升级膜片钳系统