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南京IP免疫沉淀磁珠货期

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验设计需要考虑多个方面，以确保...

免疫沉淀基本参数

品牌
世途科生物
产品名称
免疫沉淀磁珠Protein A/G
有效期
12个月

免疫沉淀企业商机

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验设计需要考虑多个方面，以确保实验的准确性和可重复性。

1. 目标蛋白的选择：确定你想要研究的目标RNA结合蛋白（RBP）。

2. 阳性和阴性对照：设计实验时，需要包括阳性对照和阴性对照。

3. 细胞培养与裂解：选择合适的细胞类型进行培养。

4. 抗体孵育：将特异性抗体与细胞裂解液孵育，以形成抗体-蛋白质-RNA复合物。

5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子进行免疫沉淀，捕获抗体-蛋白质-RNA复合物。

6. 洗涤和分离：洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。从珠子上分离RNA，可能需要使用低pH缓冲液或蛋白酶K处理。

7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下来的RNA。

8. 数据分析：对实验结果进行定量分析，比较不同样品之间的RNA水平。

9. 实验重复：为了确保结果的可靠性，实验应该进行至少三次重复。免疫沉淀技术ChIP实验步骤。南京IP免疫沉淀磁珠货期

10. 技术验证：使用其他技术（如RNA-pull down或FISH）验证RIP实验结果。

免疫沉淀实验步骤：

1. 样品制备

a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱

温州ChIP免疫沉淀实验视频免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠？

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。

基本原理

免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质（抗原）之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体，可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。

免疫沉淀技术有多种类型，包括：

1. 个别免疫沉淀法（Individual IP）

2. 免疫共沉淀法（Co-IP）

3. 染色质免疫沉淀法（ChIP）

4. RNA免疫沉淀法（RIP）

近年来，免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。

Co-IP（免疫共沉淀）技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用，其应用场景如下：

1. 蛋白质相互作用网络的鉴定：Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络，发现目标蛋白的结合伙伴。

2. 信号传导途径的研究：通过Co-IP技术，科学家们发现了许多关键的细胞信号通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。

3. 药物靶点筛选：利用Co-IP技术，研究人员可以筛选潜在的药物靶点。

疾病机制研究：通过分析疾病相关蛋白质的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。

4. 抗体药物开发：Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性，评估抗体药物的亲和力和特异性。

5. 转录因子研究：Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用，进而揭示基因调控网络。

免疫沉淀技术ChIP是什么？

免疫沉淀纯化所得抗原纯度低一般有多种原因：

1. 非特异性蛋白污染

如果洗脱所得抗原纯度较低，则有几种方法可以进行优化。在结合或洗涤缓冲液中加入去污剂或其他可以降低非特异性结合的组分。使用普通微珠预纯化样本还可以降低非目标分子的共纯化。此外，还可以使用无关蛋白 (如BSA) 封闭微珠。

2. 抗体污染

使用蛋白A、G或A/G的经典免疫沉淀实验中会出现抗体与抗原共洗脱的情况。如果共洗脱会影响下游分析，则需要使用抗体通过共价连接固定至微珠的方法进行实验，如Pierce 直接 IP 或交联 IP 的形式。

免疫沉淀技术Co-IP的优缺点是什么？杭州Protein AG免疫沉淀外包公司

免疫沉淀技术是什么？南京IP免疫沉淀磁珠货期

免疫沉淀（ChIP）实验中抗体的选择非常关键，因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。

1. 特异性：抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性，以避免与其他蛋白发生非特异性结合，导致假阳性结果。

2. 亲和力：抗体对目标蛋白的亲和力要足够高，以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。

3. 抗体类型：单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性，而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。

4. 应用验证：选择已经过免疫沉淀（ChIP）或相关应用（如Western blot, IHC）验证的抗体，这增加了实验成功的可能性。

5. 供应商信息：选择信誉良好的抗体供应商，并查看供应商提供的技术数据和客户评价，以帮助做出决策。

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