真核生物的基因组 DNA 以染色质(Chromatin)的形式存在。因此,研究蛋白质与 DNA 在染色质环境中的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径,而染色质免疫共沉淀(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)技术是目前公认的研究此相互作用的选择,是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下,固定蛋白质-DNA(染色质)复合物,并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法(抗体亲和)沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的 DNA,通过对目的片段的纯化与后期检测,从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠?北京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠货期
免疫沉淀(RIP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。
2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性,而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证:选择已经过免疫沉淀(RIP)或相关应用(如Western blot, IHC)验证的抗体,这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息:选择信誉良好的抗体供应商,并查看供应商提供的技术数据和客户评价,以帮助做出决策。
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免疫沉淀RIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀(IP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。
2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性,而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证:选择已经过免疫沉淀(IP)或相关应用(如Western blot, IHC)验证的抗体,这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息:选择信誉良好的抗体供应商,并查看供应商提供的技术数据和客户评价,以帮助做出决策。
免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠?
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物学实验方法,用于从细胞或组织裂解物中分离和纯化特定蛋白质。这项技术依赖于抗体的高度特异性,通过抗体与目标蛋白质的结合,实现对目标蛋白质的富集和纯化。
具体操作步骤通常包括以下几个阶段:裂解细胞或组织,抗体与蛋白质结合,固相支持物的使用,免疫复合物的捕获,洗涤,洗脱分析。
免疫沉淀技术不仅可以用于检测蛋白质的存在和量,还可以用于研究蛋白质的翻译后修饰、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质稳定性以及蛋白质的功能等。此外,免疫沉淀技术是许多其他高级实验技术的基础,如染色质免疫沉淀测序(ChIP-Seq)和蛋白质相互作用网络分析等。
免疫沉淀技术RIP的实验设计。上海anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠货期
免疫沉淀Co-IP抗体的选择?北京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠货期
免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物化学方法,它利用特异性抗体对抗原进行亲和纯化。在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A/G-Beads(预先将Protein A/G固定结合在磁珠上),根据抗原与抗体、Protein A/G与抗体的Fc的特异性,形成“抗原-抗体-Protein A/G-Beads”复合物,清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白,检测是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技术常用于从细胞或组织裂解物中分离用于免疫印迹检测或其他检测技术的蛋白和其他生物分子。它的目标是分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测的蛋白质。
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