细胞培养中,需要去除支原体的污染:支原体污染是细胞培养中 普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养 – 阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失,耽误研究时间
07/ 实验结果的不可靠性,实验结果的重复性 降低
08/ 生物安全问题
支原体检测有哪些方法?苏州支原体检测试剂货期
支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养,这取决于多种因素,包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法:
1. 直接丢弃:对于非重要的细胞,如果培养中的细胞、WCB的细胞等,可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。
2. 使用支原体清除剂:支原体清除剂处理细胞,作用浓度为25μg/ml,两周可以清*支原体。
3. 使用支原体清*培养基:每2~3天更换一次新鲜培养液,并用无菌的PBS洗涤细胞,处理15天后进行支原体检测,以确定支原体是否被完全去除。
4. 支原体去除试剂:这是一种混合制剂,可以通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果,且对细胞无伤害
细胞培养支原体检测试剂细胞培养中污染了支原体会怎么样?
一步法支原体检测试剂盒的防污染版本通常采用等温扩增技术,如LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)原理,通过支原体特异性引物在恒温条件下对样本进行检测,终通过颜色变化确定样品中是否含有支原体污染。这种方法的优势在于:
1. 快速检测:可以在较短的时间内完成检测,通常在60分钟以内。
2. 高灵敏度和特异性:等温扩增技术可以检测到非常低浓度的支原体DNA。
3. 操作简便:不需要复杂的设备,如PCR仪或电泳设备,只需水浴锅即可完成扩增反应。
4. 减少污染风险:由于无需开盖电泳,可以减少因气溶胶造成的交叉污染。
此外,试剂盒还包含UNG(Uracil-N-Glycosylase)酶,用于防止PCR过程中的污染,UNG酶可以消化反应液中可能存在的尿嘧啶,从而减少因污染导致的假阳性结果。
细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起:
1. 扩增产物污染:PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理,极微量的污染就可能导致假阳性结果。
2. 引物设计不当:引物设计不够特异性,可能会与非目标序列发生反应,导致非特异性扩增。
3. 试剂质量问题:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳,可能引起非特异性扩增或假阳性结果。
4. 操作技术问题:实验操作不规范,如混合样本、标签错误或样本标识不清等,可能导致假阳性结果。
5. PCR反应条件设置不当:不恰当的PCR反应条件,如温度和时间选择不当,可能导致非特异性扩增。
6. DNA污染:PCR环境中的DNA污染会干扰结果,导致假阳性
为什么要去除支原体?
细胞培养中,支原体检测的重要性体现在以下几个方面:
1. 高污染发生率:支原体对培养细胞的污染发生率非常高,据估计平均发生率在60%左右。
3. 隐匿性强:支原体污染具有很高的隐匿性,早期不容易被发现,除非使用特异性和灵敏度都非常高的专业检测试剂盒。
3. 影响实验结果:支原体污染会改变细胞的生理性质,影响实验结果的准确性。细胞培养物一旦被支原体污染,会改变细胞DNA、RNA及蛋白表达,导致实验数据不准确、不稳定。
4. 难以通过肉眼或常规方法发现:支原体污染无法通过肉眼检查细胞来发现,也不能通过向培养基中加入抗*素控制。
5. 对细胞培养数据可靠性的影响:支原体污染会降低细胞系的有效性,使得细胞培养数据失去可靠性,无法为生命科学研究提供有意义的数据。
6. 预防和控制污染的必要性:定期进行支原体检测是细胞培养实验室进行自我质量监控的必要组成部分,有助于及时发现并控制污染,保证实验的准确性和重复性。
7. 避免细胞株受损:支原体污染可能导致细胞株受损,影响细胞株的质量和研究价值。及时检测和清*支原体污染有助于保护珍贵的细胞资源
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细胞库支原体检测的必要性?苏州支原体检测试剂货期
支原体污染一旦发生,不仅对细胞培养造成严重影响,甚至可能导致实验结果失真。而且支原体污染在细胞培养实验中相当常见。因此,预防措施是确保细胞培养环境和实验结果可靠性的重要手段。
01/ 良好的无菌技术及实验操作,保证操作不会引入新的污染
02/ 保持实验空间的清洁
03/ 确保从可靠的来源获取细胞,减少不同细胞之间的交叉传染
04/ 防止交叉污染
05/ 减少气溶胶生成
06/ 谨慎使用抗*素
07/ 定期支原体筛查
08/ 丢弃或处理受到支原体污染的细胞
09/ 保持良好的记录
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