为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力，用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时，西妥昔单抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分钟内完全去除，PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下，PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件，将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化，分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。GalNAcEXO冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在2000单位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc残基。上海瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
为了研究 OglyZOR 对天然糖蛋白的活性，将该酶与依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或没有 SialEXO 孵育 1 小时。当唾液酸被去除时，OglyZOR酶有效地水解了所有三种底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 （Gal-β1,3-GalNAc）。这使得这些酶适合在LC-MS分析之前制备样品，以鉴定其他PTM或确认氨基酸序列O-糖基化生物制药的全去糖基化：O-糖基化生物制药（如依那西普）很难表征。为了能够通过质谱法测定完整质量数，我们进行了酶促总去糖基化。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解，而O-聚糖可以与OglyZOR和SialEXO一起去除。。北京PNGaseF去糖基化酶生物药物开发与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc（称为 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解。
Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖：依那西普是一种融合蛋白，由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇，使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性，制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品：（i）携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白，（ii）用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基， 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品（图1）。作为比较，SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中，以将Fc区与大多数C端糖肽分离，以促进其表征。
Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率（图3）。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽，而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具选择性的氨基酸序列偏好，此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外，ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解，如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品（T184-S199和T200-H204;图2b和d），而在ImpaRATOR消化的样品中，具有漏裂的相应肽（S184-H204）的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率，但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构，包括唾液酸化物种。例如，条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较，在OpeRATOR中，必须去除唾液酸才能产生酶活性，这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。FucosEXO 在1小时内对所有三种 TNFR 蛋白去岩藻糖磺酸处理。
用于糖蛋白去唾液酸化的冻干酶混合物。Genovis的SialEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-连接唾液酸的冻干酶。 Genovis的SialEXO 2-3冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在500个单位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 与唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一种 α2-3 特异性唾液酸酶，允许对 α2-3 连接的唾液酸进行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小时内实现。用SialEXO处理血清，上样于GlycOCATCH，洗涤，洗脱O-糖基化蛋白。Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。安徽高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
SialEXO 2-3唾液酸酶，对 α2-3连接的唾液酸靶向水解。上海瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白，在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签，分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并释放出聚糖。效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。上海瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性，因此需要在开发和生产过...
【详情】上海倍笃生物科技有限公司（简称“倍笃生物”），由中国科学院及生物医药产业界人士，于2018年1月共同...
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【详情】Genovis 是一家瑞典生物技术公司，自2010年起，为生物制药公司提供SmartEnzymes ...
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【详情】Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结...
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