Core 1型O-聚糖的水解:O-糖基化不仅难以研究,其自然异质性也会导致其他分析出现问题。例如,由于样品中存在许多不同的糖型,因此对完整或中等水平的重糖基化蛋白质进行质谱分析可能非常困难。酶法去除N-聚糖的解决方案已经存在多年,Genvois的PNGase F是一种非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑战性,现有的O-糖释放化学方法通常会导致蛋白质发生重大修饰,因此不太适合下游分析。1. 用于方法开发的灵活产品形式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。连接的岩藻糖残基,而对于非常复杂的样品可能需要更长的孵育时间。吉林PNGaseF去糖基化酶
α连接的Genovis的GalNAcs的水解:GalNAcEXO 是一种 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶,可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 残基。与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc(称为 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解,并且该酶还在 α1-3 连接的末端 GalNAcs 上显示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一种外α-N-乙酰半乳糖胺酶,用于有效水解与糖蛋白(Tn 抗原)中的丝氨酸或苏氨酸残基相连的 α-N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)。该酶还在 α1-3 连接的末端 GalNAc 上显示活性。GalNAcEXO 在天然条件下水解糖蛋白上的 GalNAc,在 pH 值 6.0 至 7.6 范围内具有高度活性。山西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发Genvois展示了使用两种zhiliao蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能:依那西普和促红xibao生成素 (EPO)。
GalNAcEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalNAcEXO酶,用于水解糖蛋白上的GalNAc残基,而不会用酶污染制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. 终样品中不含酶。用于水解离心柱中糖蛋白上的Genovis的GalNAc残基的固定化酶。GalNAcEXO 酶是一种n 外α-N-乙酰半乳糖氨酸酶,可快速有效地水解来自天然 O-糖蛋白的 z es GalNAc 残基。 该酶来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为52 kDa。 该酶在 Tn 抗原和 α1-3 连接末端 GalNAcs 上均显示活性。在这里,我们展示了如何使用GalNAcEXO来表征复杂的生物制药。
Genovis的PNGase F(肽 N-糖苷酶 F)是一种糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。该酶用于MS分析前的样品制备,以降低蛋白质异质性并实现游离的聚糖分析,并研究N-聚糖的功能作用。1. 对所有哺乳动物N-聚糖的高效水解;2.对多种糖蛋白具有活性;3.可固定在即用型离心柱产品形式;4. 自动化友好型,96孔板,用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一种 O-糖依赖性蛋白酶,可消化携带粘蛋白型。O-聚糖的蛋白质,包括唾液酸化物质、糖基化丝氨酸和 Thr 残基的 N-末端。该酶产生携带 O-糖的糖肽,从而实现 O-糖谱分析、位点占用测定和 O-糖肽图谱以及使用 LC-MS 分析的中级方法。1. 特异性广 - 接受多种 O-聚糖变体,包括唾液酸化物种;2. 可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端;3. 稳健的消化,增强复杂生物制药的表征。C1抑制剂的去糖基化:使用PNGaseF、OglyZOR和SialEXO、GalNAcEXO1。
Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率(图3)。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽,而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具选择性的氨基酸序列偏好,此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外,ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解,如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品(T184-S199和T200-H204;图2b和d),而在ImpaRATOR消化的样品中,具有漏裂的相应肽(S184-H204)的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率,但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构,包括唾液酸化物种。例如,条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较,在OpeRATOR中,必须去除唾液酸才能产生酶活性,这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之,ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。PNGase F去除N-糖,被用于MS分析的样品制备,以降低蛋白质的异质性,分析游离的糖,并研究N-糖的功能作用。陕西N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
在天然条件下用固定化PNGase F去除zhiliao性抗体;吉林PNGaseF去糖基化酶
SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白,在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签,分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并释放出聚糖。效率;3. 适用于自动化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。吉林PNGaseF去糖基化酶
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