GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis的OpeRATOR酶,该酶经过工程设计,可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。 结合在pH 5-8的生理缓冲液中进行。由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用,可以用8M尿素进行洗脱。或者,可以使用活性OpeRATOR酶进行洗脱,该酶消化O-聚糖位点的N末端结合的O-糖蛋白。在后一种情况下,肽在天然条件下回收。OpeRATOR 冻干酶包含在购买中。由于 O-糖蛋白上的旋亚氨酸化 O-聚糖与树脂结合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 冻干也包含在购买中。PNGase F(肽 N-糖苷酶 F)是一种糖酰胺酶,可水解内层 GlcNAc 之间的酰胺键。陕西用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
糖蛋白性能测试:O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO,这些蛋白携带多达11个O-聚糖,这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理,而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。福建高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究倍笃生物代理多条产品线,用于聚糖分析用酶、ADC偶联技术、QED抗体对、AAV中和抗体、IdeS蛋白酶等。
与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括:OmniGlyZOR 微离心柱;PNGase F 冻干;RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性,否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化:对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白,OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。
蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性,因此需要在开发和生产过程中进行表征和监测。常见的聚糖分析工作流程是用PNGase F释放N-聚糖,然后用荧光标记物(如2-AB、2-AA、普鲁卡因胺或RapiFluor-MS™(沃特世公司))标记生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛细管电泳分离标记的聚糖,以表征和定量不同的聚糖结构。 在这里,使用游离聚糖方法分析zhiliao性抗体曲妥珠单抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠单抗和依那西普在天然条件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小时,而RNase B需要变性和还原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分钟之前,用RapiGest™ SF表面活性剂(沃特世公司)和TCEP处理RNase B。 用RapiFluor-MS标记所得游离的聚糖,并通过HILIC UPLC-FLD-MS进行分析。GalNAcEXO 酶来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为52 kDa。
为了研究 OglyZOR 对天然糖蛋白的活性,将该酶与依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或没有 SialEXO 孵育 1 小时。当唾液酸被去除时,OglyZOR酶有效地水解了所有三种底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 (Gal-β1,3-GalNAc)。这使得这些酶适合在LC-MS分析之前制备样品,以鉴定其他PTM或确认氨基酸序列O-糖基化生物制药的全去糖基化:O-糖基化生物制药(如依那西普)很难表征。为了能够通过质谱法测定完整质量数,我们进行了酶促总去糖基化。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解,而O-聚糖可以与OglyZOR和SialEXO一起去除。。GalactEXO在天然条件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的宽pH值范围内显示活性。北京瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶
使用OpeRATOR对胞生成素(EPO)进行O-糖位点特异性消化:确定中级水平的 O-糖基化位点。陕西用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用,但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。 为了证明PNGase F固定化和PNGase F冻干在天然反应条件下有效去除Fc N-聚糖,对zhiliao性抗体曲妥珠单抗进行了处理。图2中的质量数偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F冻干或PNGase F固定化孵育1小时后,曲妥珠单抗上的Fc N-聚糖成功去除,与在溶液中用PNGase F冻干处理的样品相比,没有酶干扰用PNGase F固定处理的样品的分析。陕西用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性,因此需要在开发和生产过...
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