与IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一种半胱氨酸蛋白酶,可在铰链上方的单个位点(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单一的消化位点是人IgG1三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。GingisKHAN需要温和的还原条件才能具有活性,并且在37°C和pH8下获得活性。还原剂(2mM半胱氨酸)与酶一起提供。GingisKHAN是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。该酶用于使用LC-MS表征基于抗体的生物zhiliao药物,研究Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应,并鉴定翻译后修饰。有效消化,适用于灵敏的体内或基于细胞的检测。云南FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
为了让所有实验室都能同时快速自动消化多种抗体,Genovis的FabRICATORMagIC的设计具有灵活性,适用于一系列自动化平台。我们在ThermoScientific™KingFisher™纯化系统上优化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以转移到其他自动化平台,如果没有自动化,在振动台上也能同样出色地工作。消解后,将含有处理样品的深孔板直接转移到LC-MS的自动进样器中进行快速色谱分析,或转移到其他分析方法进行分析。FabRICATORMagIC与在消解缓冲液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以极大限度地减少自动化系统中可能发生的纯粹压力。使用KingFisher仪器处理样品时,样品制备非常简单。将样品、树脂和缓冲液移液到指定的孔或板中,然后将板放入仪器中。设计用于FabRICATORMagIC的BindIt™协议将控制每个步骤的孵育温度和时间。海南FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切FabRICATOR(IdeS蛋白酶)的一大优势是速度!
作为免疫系统的重要组成部分,IgA在自身免疫性疾病、过敏反应、胃肠道疾病等许多不同的健康状况中发挥作用。在天然条件和复杂生物样品中选择性和特异性消化IgA的能力在临床医学和研究中具有重要价值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候选物样品复杂性并简化IgA分析表征的宝贵工具。人IgA1和IgA2之间的一个显着结构差异是铰链区域。与IgA2相比,IgA1具有更长的富含O-聚糖且更灵活的铰链区域。IgASAPSub1的消化位点位于该扩展区域,使酶具有IgA1特异性。IgA2亚类以三种等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和缬氨酸(V)之间消化IgA1和IgA2m1只有N端到铰链区域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸残基被精氨酸(R)残基取代,因此这两种同种异体型的IgA2对消化具有抗性。
不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一种蛋白酶,可在铰链上方的单个位点消化人 IgG1,在两小时内产生完整的 Fab 和 Fc 片段,无需还原条件。该酶对具有突变铰链区域的抗体(如 LALA 突变)具有活性,并启用中级 LC-MS 来表征具有突变铰链的抗体的关键质量属性。FabDELLO 在铰链上方的单个位点消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单个消化位点是人 IgG1 的三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。FabDELLO在天然条件下具有活性,需要钙离子的存在。在37°C和pH 7-8.5下获得良好活性。FabDELLO 是从 Bdellovibrio 细菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 32 kDa。并通过反相LC-MS进行分析,消化产生均匀的Fab和Fc片段。
与IdeS不同,融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的,以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸,例如甘氨酸残基(G),或甘氨酸残基散布丝氨酸残基(GS)以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性,不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而,这些新模式带来了新的分析挑战,需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法,涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小,可以获得高质量的质谱图,并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性,因此很难分离结构域以进行深入分析。因此,Genovis开发了GlySERIAS,不同于IdeS酶,一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域,并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。IgMBRAZOR 是IgM 特异性蛋白酶。海南FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis发现更多的缓冲液与FabRICATOR活性兼容。云南FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
Genovis提供FabRICATOR(IdeS)验证包。三种不同批次的冻干酶,用于验证基于FabRICATOR的分析方法。FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。FabRICATOR酶已成为生物制药行业中使用的工具,用于表征用于zhiliao用途的单克隆抗体、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制药。每批FabRICATOR酶在释放前都经过严格的酶活性、特性和纯度测试。FabRICATOR验证试剂盒由三批冻干酶组成,使方法验证更容易。每批都附有一份分析证书。QC应用的简化方法验证;批次间变异性评估的理想形式;提高批量放行检测性能的可信度。云南FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有...
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