pA-Tn5转座酶的高活性是其重要特性之一,这种高活性主要来源于以下几个方面:1.**转座酶突变体**:pA-Tn5转座酶是由Tn5转座酶的高活性突变体构成的。这种突变体相比野生型Tn5转座酶,在体外的转座效率显著提高,通常提升1000倍以上。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5转座酶将ProteinA与高活性Tn5转座酶融合,这种融合不仅保留了Tn5转座酶的高效DNA切割能力,还通过ProteinA的抗体结合特性,提高了对特定DNA序列的靶向能力。3.**转座随机性**:pA-Tn5转座酶能够在整个基因组上实现随机的DNA切割,这为高通量测序提供了广的覆盖度。4.**稳定性**:高活性的pA-Tn5转座酶在各种实验条件下都能保持稳定,包括在不同的温度和pH值条件下。5.**插入位点易测序**:pA-Tn5转座酶产生的DNA片段具有明确的插入位点,这些位点容易被高通量测序技术识别和分析。6.**高效片段化**:在CUT&Tag等实验中,pA-Tn5转座酶能够高效地实现目标蛋白结合DNA的片段化,为后续的测序和分析打下基础。7.**低细胞投入量**:由于其高活性,pA-Tn5转座酶允许从极少量的细胞中进行实验,如单细胞水平的研究。

pA-Tn5转座酶是一种经过特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5转座酶组成,具有以下主要应用:1.**高通量测序建库**:pA-Tn5转座酶可以用于快速构建用于高通量测序的DNA文库,通过其转座酶活性实现DNA片段化,同时加上测序接头,简化了传统DNA测序建库的多步过程。2.**CUT&Tag技术**:这是一种新兴的蛋白质与DNA相互作用研究方法,pA-Tn5转座酶利用ProteinA与特定抗体结合,将转座酶带到目标蛋白附近进行DNA切割和标签添加,实现对蛋白质结合位点的高通量测序分析。CUT&Tag技术具有高特异性、低背景噪音、高灵敏度、良好重复性等优点,适用于表观遗传学、干细胞等领域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5转座酶也可用于ATAC-seq实验,这是一种研究染色质可及性的方法,通过转座酶在没有核酸酶消化的情况下切割染色质DNA,然后在切割位点加上测序接头,进行后续的测序分析。4.**转录组测序快速建库**:有研究开发了基于Tn5转座酶的转录组测序快速建库方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5转座酶直接作用于RNA/DNA杂交链,简化了建库过程,适用于单细胞转录组测序,提高了样本的利用率和测序速度。

Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease)高度特异性地作用于5'端磷酸化的双链DNA主要通过以下几个方面实现:1.**结构特异性识别**:Lambda核酸外切酶具有识别特定DNA结构的能力,特别是5'端磷酸化的双链DNA。这种识别能力通常由酶的活性位点结构决定,能够与5'-磷酸基团形成特定的相互作用。2.**酶活性位点**:酶的活性位点含有氨基酸残基,这些残基能够与5'-磷酸基团形成氢键或其他非共价相互作用,从而稳定酶与DNA的结合。3.**切割机制**:Lambda核酸外切酶通过水解5'-磷酸二酯键来降解DNA链。它从5'端开始,逐个移除核苷酸,直到遇到非5'-磷酸化的末端或遇到结构上的障碍。4.**低活性对非特异性底物**:对于5'-羟基(OH)末端的DNA或单链DNA,Lambda核酸外切酶的活性降低,因为这些底物缺乏与酶活性位点结合所需的特异性相互作用。5.**酶动力学**:Lambda核酸外切酶对5'-磷酸化双链DNA的酶动力学参数(如Km和Vmax)与对非特异性底物的参数有差异,这反映了其对特异性底物的高亲和力和高催化效率。6.**过程性(Processivity)**:一旦Lambda核酸外切酶结合到特异性底物上,它可以连续移除多个核苷酸,而不需要频繁地与底物解离和重新结合,这增加了酶的效率。
Blood Direct PCR Master Mix (2×)的组分通常包括以下几类:高保真DNA聚合酶:例如,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,这是一种热稳定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,并与Sso7d结构域融合以增强过程性3940。dNTPs:提供DNA合成所需的四种脱氧核苷三磷酸。优化的缓冲体系:包含适合于血液样本PCR扩增的pH和离子强度,以及能够抵抗血液样本中抑制剂的特殊成分。稳定剂:保证预混合溶液在储存和使用过程中的稳定性。抗抑制剂成分:一些Blood Direct PCR Master Mix含有能够抵抗血液样本中可能存在的PCR抑制剂的成分。可选的染料:某些产品可能含有用于电泳的染料,允许PCR产物直接上样进行电泳分析,无需额外的上样缓冲液。其他可选组分:根据需要,可能包括MgCl2、EDTA、DMSO等,用于优化特定样本或反应条件42。泛素蛋白(Ubiquitin,简称Ub)是一种在真核细胞中普遍存在的小分子蛋白,具有高度保守性。

DNaseI是一种使用的酶,它能够水解单链或双链DNA,产生5'端为磷酸基团的二核苷酸、三核苷酸或更短的寡核苷酸片段。这种酶的活性依赖于钙离子,并且可以被镁离子或二价锰离子启动。在镁离子存在的情况下,DNaseI可以随机剪切双链DNA的任意位点;而在二价锰离子存在时,它可以在同一位点剪切DNA双链,形成平末端或1-2个核苷酸突出的粘末端。DNaseI的一个特点是它不含RNase活性,因此可以用于处理各种RNA样品,而不会对RNA造成降解。DNaseI的应用非常广,包括但不限于:-制备不含DNA的RNA样品;-在RT-PCR反应前去除RNA样品中可能的DNA污染;-体外RNA聚合酶催化的RNA转录后去除DNA模板;-进行DNaseI足迹实验研究DNA-蛋白质相互作用;-缺口平移(nicktranslation);-产生DNA随机片段文库;-在细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。DNaseI通常从牛胰腺中纯化得到,其分子量约为32kDa(单体)。活性定义为在37℃、10分钟内,能够完全降解1μgpBR322质粒DNA所需的酶量。在实验中,DNaseI的活性单位通常以Kunitz单位来表示,该单位是基于特定条件下酶降解DNA的能力来定义的。通过测序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和测序)来验证gRNA的编辑效率,筛选出效率高的gRNA序列 。Recombinant Mouse sTNF RII/TNFRSF1B
来源于Francisella tularensis:FnCas12a是一种来源于Francisella tularensis菌株的核酸内切酶。Recombinant Human IgG1 Fc Protein,Tag Tag
磁珠法质粒小量抽提试剂盒是一种利用磁性纳米分离技术和细菌细胞的SDS碱裂解法从菌体中提取高质量质粒DNA的实验工具。以下是一些关于磁珠法质粒小量抽提试剂盒的关键信息:1.**操作简便性**:-操作快速简单,可以在60分钟内完成96个不同样品的提取,实现质粒提取的高通量化和自动化。2.**高纯度和高产量**:-抽提得到的质粒纯度高,OD260/OD280比值一般为1.8~1.9之间,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于转化、DNA测序、PCR和酶切等后续实验。3.**试剂盒组件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等组分。4.**应用范围**:-适用于从大肠杆菌中抽提小量质粒,所得质粒可直接用于细胞转染、DNA测序、PCR等实验。5.**效率和纯度**:-与同类产品相比,提取效率更高,获得质粒的纯度更高;与柱式法相比,可减少离心次数,获得完整性更好的质粒。6.**注意事项**:-例如,SgMagBeads需要充分洗涤和干燥,以保证无乙醇残留,并且在吸取上清时避免吸入SgMagBeads。7.**保存条件**:-室温保存,有效期一年。磁珠长期不使用时,可以4℃保存以延长保存时间。
重组人LDLR蛋白(Recombinant Human LDLR Protein, His-Avi Tag)是一种重要的细胞表面受体,全称为低密度脂蛋白受体(Low-Density Lipoprotein Receptor),主要在肝脏细胞表面表达,负责识别并结合血液中的低密度脂蛋白(LDL),介导其内吞进入细胞,从而调节体内胆固醇的代谢平衡。LDLR在维持脂质稳态、预防等心血管疾病中发挥关键作用。该重组蛋白采用真核表达系统(如HEK293细胞)制备,确保了其天然构象和生物活性。其N端融合了His标签,便于通过Ni-NTA亲和层析进行高效纯化;同时带有Avi标签,可在体内或体外通过生物素连接酶...