寡核苷酸脂质体
寡核苷酸是一种<50个碱基的短核酸聚合物。AS-ODN（反义寡脱氧核苷酸）是与互补的mRNA序列结合的单链DNA或RNA。由于AS-ODNs可以下调某些RNA并抑制靶蛋白的表达，因此它们被认为具有作为核酸药物的潜力。然而，为了开发基于寡核苷酸的***方法，必须克服寡核苷酸在生理环境中的不稳定性及其细胞摄取不足的问题。Zhang及其同事开发了由1,2-二油酰基-3-三甲铵基丙烷(DOTAP)、磷脂酰胆碱和胆固醇组成的阳离子脂体，用于针对Raf-1蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(一种已知的*****靶标信号蛋白)的AS-ODNs全身递送。他们观察到,全身给药AS-ODNs与阳离子脂质体复合物可降低肝脏和**组织中Raf-1蛋白的表达，并抑制小鼠PC-3**的生长。在另一项研究中，bcl2特异性AS-ODNs与鱼精蛋白和阳离子脂质体(由DC-Chol、磷脂酰胆碱和DSPE-PEG2000组成)络合。脂质体***增加Bcl-2AS-ODNs的细胞摄取，导致Bcl-2蛋白水平***下调。研究了AS-ODNs和阳离子脂质体***特应性皮炎的疗效。将靶向白介素-13的AS-ODNs与DOTAP和胆酸钠组成的阳离子脂质体配合，局部应用于特应性皮炎小鼠皮损。这种***剂量依赖性地缓解了特应性皮炎，200ugIL-13的AS-ODNs的抑制作用比较大。 被动载药⽅法是在脂质体制备过程中对药物进⾏包封的方法。吉林靶向脂质体载药
脂质体各组分对核酸递送效率的影响对于使用阳离子脂质体开发核酸***剂，一个先决条件是必须将核酸适当地递送到靶细胞并到达适当的亚细胞区室(例如，细胞质或细胞核)。已知阳离子脂质体的递送效率会受到阳离子脂质和辅助脂质类型及其组成的影响。阳离子脂质是纳米粒子的**成分，具有一个带正电的头基和一个或两个由碳氢链或类固醇结构组成的疏水尾区的共同结构。Felgner和同事报道了N-[1-(2,3-二聚氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵（DOTAP）的合成，其具有一个单价阳离子头和两个碳氢化合物尾部,并用于制备小的单层脂质体。他们将DNA包裹的脂质体转染到小鼠L细胞中,并证明阳离子脂质中和了带负电荷的DNA,使阳离子脂质体有更好的机会与带负电荷的细胞膜相互作用。从那时起，各种阳离子脂质和基于脂质的纳米颗粒被设计和评估用于核酸的细胞递送,包括DNA,siRNA,miRNA和AS-ODN。这些新的阳离子脂质已经通过文库技术和基于理性的预测相结合的方法被鉴定出来。对类脂类材料文库的筛选产生了由十个碳和两个烷基链组成的阳离子脂质，发现其比其他候选物更有效。
上海脂质体载药合成LNP载体是核酸类药物的成功载体之一。
脂质体质量控制的重要性与常规药物剂型(如⼩分⼦注射溶液)不同，脂质体中装载的***性分⼦在全⾝给药后(如静脉注射)转运到肿瘤细胞的过程更为复杂主要经历以下⼏个步骤:(1)从⾎管内间隙外渗到组织间质:脂质体通过扩散和/或对流穿越**⾎管壁不连续的内⽪连接点(100nm-2µm)进⼊**间质。同时⼀部分脂质体被MPS从体循环中***，特别是对于⼤尺⼨(>200nm、疏⽔和带电颗粒表⾯(带负电荷或正电荷)的颗粒。(2)通过扩散和对流进⾏间质运输，以接近单个肿瘤细胞。利⽤主动靶向对脂质体进⾏表⾯修饰将克服颗粒在细胞外基质(ECM)中扩散的物理阻⼒，因为颗粒上的靶向配体与肿瘤细胞表⾯的受体之间产⽣了更⾼的亲和⼒(3)通过⾮特异性或特异性结合的⽅式附着于细胞膜(4)通过内吞作⽤、膜融合或扩散进⼊细胞。内吞作⽤的途径取决于颗粒⼤⼩即⼤⼩为200nm，500nm的颗粒为⽹格蛋⽩介导的内吞作⽤和⼩泡介导的内吞作⽤，⼤胞吞作⽤可达5µm。(5)细胞内转运和药物释放。基于脂质体的这种运输过程由于循环脂质体颗粒⽆法穿过⼼脏⾎管的连续内⽪连接，与传统的阿霉素给药相⽐，Doxil明显降低了⼼脏毒性。与常规药物相⽐DaunoXome可使多柔⽐星的**递送量增加约10倍，并在体内提供持续释放。
阳离子脂质体工程系统新脂质的工程化已经被研究作为一种提高核酸递送效率的手段。例如，研究人员合成了胆固醇衍生物阳离子脂质DMHAPC-Chol，并表明其可促进血管内皮生长因子(VEGF)特异性sirna进入肿瘤细胞。在结构上，脂质在其极性氨基头部分具有可生物降解的氨基甲酰基连接剂和羟基乙基。由DMHAPC-Chol和DOPE等摩尔比例组成的阳离子脂质体将VEGFsiRNA传递到A431和MDA-MB-231细胞，并显示出>90%的VEGF蛋白表达的有效沉默。在另一项研究中，开发了一种基于胆固醇的多阳离子脂质体制剂，其中精胺的亲水部分与一个或两个胆固醇残基偶联，用于递送siRNA。由合成的多阳离子脂质和DOPE组成的脂质体可抑制表达EGFP的HEK293细胞中增强的绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。除了胆固醇衍生物，基于精氨酸的阳离子脂质也被研究用于siRNA的递送。研究人员合成了由聚l-精氨酸-9偶联聚乙二醇脂质、DOTAP、DOPE和胆固醇组成的聚l-精氨酸脂质衍生物，以增强siRNA的递送。脂质体制备方法：超声破碎和挤压技术。
脂质体靶向递送中甘露糖配体修饰由于在巨噬细胞上发现了甘露糖受体，因此甘露糖已被用于修饰阳离子脂质体以供巨噬细胞递送。为了抑制由活化的巨噬细胞诱导的破骨细胞生成，将甘露糖基化阳离子脂质体与双链寡核苷酸NFkB诱饵络合。甘露糖阳离子脂质体/NFkB诱饵复合物有效诱导NFkB活化并抑制肿瘤坏死因子-a的产生。在另一项研究中，巨噬细胞靶向NFkB诱饵装载在甘露糖基化阳离子脂质体中，用于预防脂多糖诱导的肺部炎症。气管内给药后，甘露糖标记的阳离子脂质体/NFkB诱饵复合物***下调NFkB的表达，减少肿瘤坏死因子-a和白细胞介素-1b的释放。研究人员研究了茴香酰胺修饰的阳离子脂质体将寡核苷酸靶向递送至表达sigma受体的细胞的能力。剪接开关寡核苷酸(SSOs)是一种单链寡核苷酸，可与剪接位点或剪接增强子结合，阻断内源性剪接机制的通路，并产生成熟mRNA的替代版本。在肺转移小鼠模型中，全身给药装载Bcl-xSSO的茴香胺修饰阳离子脂质体可降低**生长。一种含有DOPE的脂质制剂被发现可以增加各种细胞类型中GFP特异性siRNA的摄取。辽宁武汉脂质体载药
脂质体制备方法：溶剂注射技术。吉林靶向脂质体载药
1脂质体结构
脂质体根据室室结构和层状结构可分为单层囊泡(ULVs)、寡层囊泡(OLVs)、多层囊泡(MLV)和多泡脂质体(MVLs)。OLVs和MLV呈阴离⼦样结构，但分别存在2-5和>5个同⼼脂质双分⼦层。与MLV不同，MVLs包括数百个由单层脂质膜包围的⾮同⼼⽔室，并呈现蜂窝状结构。根据颗粒⼤⼩，ULVs可进⼀步分为⼩单层囊泡(SUVs，30-100nm)、⼤单层囊泡(LUVs，>100nm)和⼤单层囊泡(LUVs，>1000nm)。Arikaye(阿⽶卡星脂质体吸⼊悬浮液)因其⼤粒径(200-300nm)⽽被认为是LUV。Vyxeos(注射⽤柔红霉素:阿糖胞苷脂质体)是⼀种双层脂质体系统(，它是在第⼀次药物阿糖胞苷装载过程中产⽣的。内部⽚层形成的机制被解释为脂质双层的热⼒学响应，以减少脂质体的表⾯积体积⽐，这是由于⽔的流出⽽引起的，以应对外部渗透挑战。Myocet(阿霉素脂质体)和Mepact(⽶法莫肽脂质体粉剂⽤于浓缩分散输注)为MLV。丰富的⽚层为亲脂化合物的包封提供了较⼤的空间。直径为微⽶的产品有Mepact、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体混悬液)、DepoDur(硫酸**缓释脂质体注射液)和expel(布⽐卡因脂质体注射混悬液)四种。Mepactis为⽆菌冻⼲饼，⽤0.9%的⽣理盐⽔溶液重构后，会形成粒径为2.0-3.5µm的多层脂质体。 吉林靶向脂质体载药
