支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
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细胞培养中支原体检测出现假阴性结果可能由以下原因引起:
1. 样本质量问题:如果采集的样本中含有抑制剂或者样本在处理、存储过程中出现问题,可能会影响PCR反应,导致假阴性。
2. 技术或操作问题:实验操作中的误差,如样本处理不当、试剂配制错误、仪器设备问题等,都可能导致假阴性结果。
3. 检测方法的局限性:某些检测方法可能存在灵敏度或特异性不足的问题,导致无法准确检测到病原体。
4. 培养基和培养条件的影响:培养法的灵敏度容易受到培养基和培养条件的影响,如果培养条件不适宜,可能导致支原体无法生长或生长缓慢,从而检测不到。
5. 支原体种类问题:不是所有的支原体种类都能通过培养法检测到,某些特定种类的支原体可能无法在常用的培养基中生长,导致漏检。
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细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:
1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
支原体去除的原理通常涉及以下几个方面:
1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制剂来抑制支原体的生长和繁殖。例如,含有喹诺酮类、四环素衍生物类和大环内酯类抗*素的混合制剂,这些抗*素能够抑制支原体的DNA和蛋白合成。
2. 破坏细胞膜:支原体去除剂中的抑菌肽(AMPs)成分通过破坏支原体细胞膜的完整性,导致支原体细胞死亡。
3. 抑制DNA复制:支原体去除剂通过抑制支原体DNA回旋酶活性,有效抑制支原体DNA的复制,从遗传物质着手彻底杀灭支原体。
4. 协同作用:某些支原体去除剂利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的协同作用来除去支原体,穿膜肽能够帮助抑菌肽更有效地穿透细胞膜,增强其杀灭支原体的能力。
科研中常见的支原体检测方法?
支原体检测的应用场景非常广*,以下是一些主要的应用领域:
1. 细胞培养:在实验室和生物制品工厂中,细胞培养过程容易受到支原体污染。支原体污染可能导致细胞功能改变,影响实验结果和生物制品的质量。因此,支原体检测在细胞培养的质量控制中至关重要。科研中常用等温扩增的方法简单便捷。
2. 生物制品生产:在生物制品的生产过程中,如疫苗、生物药物等,需要确保产品无支原体污染,以保证其安全性和有效性。监管机构要求在生产的关键阶段进行支原体检测。通常采用qPCR的方式进行。
支原体检测PCR法和LAMP方法的优劣势比较。南京支原体检测时间
支原体检测实验的方法?南京细胞支原体检测服务
细胞培养中支原体污染会对实验结果产生多方面的影响,具体包括:
1. 细胞生长受影响:支原体污染可能导致细胞生长速度减慢,甚至停滞。
2. 细胞形态改变:支原体感*的细胞可能会出现形态的改变,如细胞体积增大、形态不规则等。
3. 细胞功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢、增殖、分化等生理功能。
4. 细胞产物改变:支原体感*可能影响细胞产生的蛋白质、细胞因子等生物活性物质的表达和分泌。
5. 实验结果不准确:支原体污染会干扰实验结果的准确性,导致实验数据不可靠。
6. 实验重复性差:支原体污染的细胞培养批次间差异大,影响实验的重复性。
7. 影响后续实验:支原体污染的细胞培养产物用于后续实验,如转染、基因编辑等,可能会影响实验效果。
8. 影响细胞培养产物的质量:支原体污染会影响细胞培养产物的质量,如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本:支原体污染需要花费额外的时间和成本进行检测、处理和重复实验。
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