支原体去除和支原体预防是两种不同的策略,它们在细胞培养和生物制品生产中都非常重要。
支原体去除是指在细胞已经被支原体污染后采取的措施。这通常涉及到使用特定的抗*素或化学试剂来消灭或抑制支原体的生长。例如,根据的描述,支原体去除试剂是一种混合抗*素制剂,它含有三种对支原体具有抑菌作用的组分,可以取得良好的支原体清*效果。使用这种方法时,细胞需要在含有去除试剂的培养基中培养一段时间,然后更换培养基并检测支原体是否已被清*。
支原体预防则是指在细胞培养过程中采取的预防措施,以避免支原体污染的发生。这包括保持实验室环境的清洁、使用无菌技术、对所有培养基和器材进行适当的消毒处理等。根据的背景介绍,预防措施还包括对细胞培养层流柜保持整洁,避免在无盖器皿上方舞动手掌和手臂,以及立即清理溢出物等。这些措施有助于减少支原体污染的风险。
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一步法快速支原体检测的原理主要基于等温扩增技术,这是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。以下是具体的步骤和原理:
1. 等温扩增技术:一步法快速支原体检测试剂盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,环介导等温扩增)技术或类似的等温扩增技术。这些技术允许在恒定温度下进行DNA的快速扩增,通常在60-65°C之间。
2. 特异性引物:该方法使用设计好的特异性引物,这些引物靶向支原体DNA的保守区域。引物的设计确保了扩增过程的特异性,从而减少非目标序列的扩增。
3. 快速扩增:在适宜的条件下,等温扩增技术可以在15至60分钟内实现高达10^9至10^10倍的核酸扩增,从而快速检测出支原体的存在。
4. 颜色变化指示:一步法试剂盒中通常包含有颜色指示剂,当支原体DNA被扩增时,反应液的颜色会发生变化,从而可以通过肉眼直接观察到检测结果。例如,从蓝紫色变为天蓝色,表示样本中存在支原体。
5. 操作简便:一步法支原体检测不需要复杂的设备,通常只需要水浴锅或PCR仪即可完成操作,使得检测过程更加简便快捷。
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支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一,细胞库中或正在使用的细胞中,支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响:
01/ 争夺营养:支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失:支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
支原体预防的实验步骤主要包括以下几个方面:
1. 无菌操作技术:在细胞培养过程中,严格遵守无菌操作规程,包括穿戴适当的实验服、手套,使用无菌工具和耗材。
2. 环境控制:保持实验室环境清洁,定期消毒工作台和实验室表面,使用层流罩或生物安全柜进行细胞操作。
3. 细胞培养基和试剂的无菌过滤:所有加入到细胞培养基中的试剂和补充物,如血清、抗*素等,都应通过无菌过滤以去除支原体。
4. 细胞培养基和试剂的检测:在添加到细胞培养物之前,对新的细胞培养基和试剂进行支原体检测,以确保它们没有被污染。
5. 定期检测:即使采取了预防措施,也应定期对细胞培养物进行支原体检测,以确保及时发现并处理潜在的污染。
6. 避免交叉污染:避免从一个细胞培养物到另一个的交叉污染,使用的移液器和工具,避免在不同细胞培养物之间重复使用。
7. 细胞培养物的筛选:使用已知无支原体污染的细胞株进行实验,或者在开始实验前对细胞株进行筛选。
8. 使用预防性试剂:在某些情况下,可以在细胞培养过程中添加特定的预防性试剂,如支原体预防剂,以降低污染风险。
支原体的检测方法有哪些?
细胞培养中支原体污染的检测方法有多种,以下是一些常用的检测手段:
1. 显微镜检测:通过相差显微镜观察细胞,支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。
2. 荧光染色法:使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合,使支原体的DNA着色,然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。
3. 电镜检查:使用扫描电镜或透射电镜观察,这是一种简便快速的方法。
4. 聚合酶链反应(PCR):使用特定的引物对支原体DNA进行扩增,是一种高灵敏度的检测方法。
5. 等温扩增法:基于LAMP技术,室温反应后观察颜色变化确认是否有支原体污染。
对于同一个样品,为什么一步法恒温试剂盒检测结果为阳性,而PCR检测为阴性呢?北京细胞支原体去除试剂多少钱
支原体去除和支原体预防有什么区别?上海细胞培养支原体检测试剂现货
预防细胞培养过程中的支原体污染至关重要,因为一旦发生污染,可能会严重影响实验结果和细胞的生长。以下是一些有效的预防措施:
1. 无菌操作:始终在无菌条件下进行细胞培养操作,包括使用无菌的移液器、手套和其他实验室器材。
2. 个人防护:穿戴适当的个人防护装备,如实验服、手套和口罩,以减少污染的风险。
3. 细胞培养室的清洁:保持实验室和细胞培养室的清洁,定期进行消毒处理。
4. 培养箱的维护:定期清洁和消毒CO2培养箱,避免飞溅和溢出,并维持严格的清洁计划。
5. 使用无支原体污染的试剂:使用经过检测确认无支原体污染的培养基、血清和其他添加物。
6. 细胞的检测:定期对细胞进行支原体污染的检测,尤其是在引入新的细胞系或传代细胞之前。
7. 培养基和试剂的过滤:使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤所有细胞培养用液体,以阻止支原体的通过。
8. 使用抗*素预防:虽然抗*素不能作为常规预防手段,但在某些情况下,可以考虑使用抗*素作为预防措施,尤其是在高风险操作中。
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