免疫组化应该选择石蜡切片还是冰冻切片？
（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是***我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
更多实验信息，请点击英瀚斯官网。 病理报告中的免疫组化到底有什么作用?江西什么是免疫组化可以做什么
免疫组化如何才能充分脱蜡？
（1）蜡不溶于水，如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短；
（2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。
（3）当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果魁伟更好。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定，脱蜡的时间，原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。
切片染色更多问题汇总，关注英瀚斯生物。 安徽细胞免疫组化英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南！
免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原（如蛋白）。immuno的词根来自操作中所使用的抗体，而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学（Immunocytochemistry，简称ICC）。这两个词大家经常混着用，看着好像差不多，但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC，组织是来自患者或动物，经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片，封片后再处理。通过这种方法，研究人员可观察细胞组分的定位，同时维持周围组织的原先结构。对于ICC，大部分细胞外基质及其他基质组分被去除，只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液，来自患者或动物（如血涂片、拭子等），或在实验室中进行的组织培养细胞系。
免疫组化的抗原修复
很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉，高压锅，蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复：柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中，预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩，孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴，将染色盘置于室温下，让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分钟。开始封闭步骤。 大鼠、小鼠组织免疫组化，找英瀚斯生物。
细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
5、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
6、PBS洗3次，每次5min。
英瀚斯生物，细胞、动物、临床样本免疫组化检测都可完成！
7、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
8、PBS洗3次，每次5min。
9、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
10、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 免疫组化失败的原因？安徽细胞免疫组化
有没有推荐的免疫组化外包公司？江西什么是免疫组化可以做什么
免疫组化的发展路程？在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断cancer、cancer分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及cancer形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥比较大的辅助作用。如果您有免疫组化相关的实验，可以与我们英瀚斯生物进行联系。江西什么是免疫组化可以做什么
