HE染色病理技术中**常用的一种方法,通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法,以达到准确,完整的病理诊断。一、染色目的 病理学的所有切片,都必须通过一种以上的染料,通过各种不同的方法,将切片中各种不同的物质,在不同染液的作用下,将其显示出来,使之在光学显微镜下,能够完全的观看各种结构。例如,HE染色,好质量的切片可以清晰地显示出多不同的结构,细胞核着蓝黑色,细胞浆着粉红色,软骨着蓝色等。清晰的结构为诊断提供的依据,因此,染色技术也是病理技术中的重要组成部分,必须不断地总结,方能提高。HE染色结果如果使用计算机分析软件分析?云南推荐的HE染色报告
HE染色常见问题:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)组织未及时固定,部分自溶;或固定不佳,深部组织未处理到。这种只能重新固定了。(2)尽管乙醇也是一种固定液,但尽量少用或不用,因为其会导致组织发硬变脆,染色效果不好。(3)包埋时蜡的温度过高,或切片后烤片时间和温度过久过高都不好,可能会导致无法染色。(4)脱蜡不彻底;染料有问题;分化过度导致的颜色变淡,镜下组织界限不清;染完后的脱水和透明不佳,水雾残留在组织上。(5)通风窗中(防止空气中的水雾),戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)。贵州专业的HE染色外包科研常备实验操作之HE染色。
HE染色细胞核灰蓝原因:(1)组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长;(2)固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。对策:理论上来说,加热处理*在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固,以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水比较好能从低浓度的乙醇开始。
HE染色多聚甲醛保存组织的注意事项:多聚甲醛放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。脾脏组织HE染色如何观察。
HE染色构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。HE染色中固定液如何配置。江西病理HE染色外包
HE染色观察细胞形态变化。云南推荐的HE染色报告
HE染色原理:一、细胞核染色原理:苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外。使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。二、细胞浆染色原理:细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被***成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比云南推荐的HE染色报告