NLS-Cas9-EGFPNuclease是一种融合蛋白,由Cas9核酸酶、核定位信号(NLS)和EGFP(绿色荧光蛋白)组成。这种融合蛋白的特点和科研应用如下:**特点:**1.**无DNA污染**:系统不添加外部DNA,降低了外源DNA污染的风险。2.**高切割效率**:NLS确保Cas9蛋白能够高效地进入细胞核,从而提高DNA切割效率。3.**低脱靶效应**:由于Cas9核酸酶的瞬时表达,减少了在非目标位点切割的可能性。4.**节省时间**:与需要转录和翻译的mRNA或质粒系统相比,NLS-Cas9-EGFPNuclease可以直接进入细胞核,无需等待转录和翻译过程。5.**EGFP标签**:EGFP作为报告基因,可用于追踪或分选转染细胞,便于通过荧光激起细胞分选(FACS)富集所需基因组编辑的细胞群,减少单细胞克隆和基因分型的劳动和成本。**科研应用:**1.**体外DNA切割筛选**:可以用于筛选高效和特异性靶向的gRNA,通过体外DNA切割实验来验证gRNA的效率和特异性。2.**体内基因编辑**:与特定的gRNA结合后,可以通过电穿孔或注射的方式进行体内基因编辑。3.**细胞追踪和分选**:利用EGFP荧光标记,可以追踪转染细胞并进行分选,这对于研究基因编辑后的细胞群体特别有用。

提高SpCas9蛋白在基因编辑中的特异性和效率是CRISPR-Cas9技术发展的关键。根据新的研究进展,以下是一些提高SpCas9特异性和效率的策略:1.**工程化改造**:通过定向进化和蛋白工程的方法,研究人员可以对SpCas9进行改造,以提高其在细胞中的基因编辑活性。例如,JenniferDoudna团队开发的工程化iGeoCas9,通过在WED结构域引入突变,显著提高了基因编辑效率,比野生型GeoCas9高出100倍以上。2.**优化gRNA设计**:合理设计的gRNA可以提高Cas9的特异性,减少脱靶效应。研究人员通过生物信息学工具和实验验证,筛选出与目标DNA序列互补性更强且特异性更高的gRNA。3.**使用高保真Cas9变体**:研究人员开发了高保真Cas9变体,这些变体在保持编辑活性的同时,降低了脱靶风险。例如,通过突变Cas9蛋白的关键氨基酸残基,可以减少其在非目标位点的切割活性。4.**PAM序列的优化**:通过改变Cas9蛋白的PAM序列识别能力,可以扩大其靶向范围,从而提高编辑效率。例如,开发能够识别非典型PAM序列的Cas9变体。5.**递送系统的优化**:使用核糖核的蛋白(RNP)复合物的形式递送Cas9和gRNA,可以提高Cas9蛋白的稳定性和编辑效率。这种方法避免了mRNA或质粒递送可能引起的免疫反应。Recombinant Mouse ANXA2 Protein,His Tag在泛素化过程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中间体。

大肠杆菌表达的重组抑肽酶(Aprotinin)是一种通过基因工程技术在大肠杆菌中生产的蛋白酶抑制剂,具有以下特性和应用:1.**来源**:重组抑肽酶是通过大肠杆菌(E.coli)表达系统生产的,确保了无动物源性成分,减少了病毒污染的风险。2.**结构**:它是一种单体球状蛋白,由58个氨基酸组成,具有三个交联二硫键的单个多肽链。3.**功能**:作为一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,重组抑肽酶能够抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶等的活性。4.**应用**:在生物技术过程中,重组抑肽酶可以替代动物源性抑肽酶,用于重组蛋白生产中抑制丝氨酸蛋白酶的活性,以及在细胞培养等过程中。5.**产品信息**:通常以粉末形式提供,具有明确的货号和规格,如1mg或10mg的包装。6.**产品性质**:包括外观、溶解度、纯度、蛋白含量、酶浓度和活性定义等详细参数。7.**储存条件**:冻干粉在2~8℃保存,有效期为2年。8.**使用方法**:推荐的结合pH>6.0,在pH<3.0的条件下不结合,可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃储存。9.**注意事项**:产品作科研用途,操作时需穿着实验服并佩戴一次性手套。
重组人血清白蛋白(rHSA)是一种重要的蛋白质,广泛应用于生物医学领域。植物表达的细胞培养级重组人血清白蛋白(rHSA)具有多项特点和科研应用价值:1.**高纯度和安全性**:植物源重组人血清白蛋白(rHSA)通过基因工程技术在植物如水稻中表达,避免了动物源成分和血源性的病毒污染的风险,提供了一种更安全、更纯净的蛋白质来源。2.**批次稳定性**:与来源于动物的血清白蛋白相比,植物表达的rHSA提供了更高的批次间一致性和稳定性,这对于科研和工业应用中的重复性和可靠性至关重要。3.**多功能性**:rHSA在细胞培养中可以作为重要的添加成分,有助于细胞生长和维持培养环境的稳定性。它还可以作为药物载体,疫苗保护剂、细胞冻存保护剂和医疗器械包埋剂等。4.**生物相容性**:由于rHSA的化学性质与天然HSA非常接近,它在生物医药生产中具有很高的生物相容性,可以用于多种药物的配方和医疗设备。5.**科研应用**:rHSA在科研中可用于细胞培养、药物载体研究、疫苗开发、组织工程和再生医学等领域。6.**生产规模**:植物表达系统具有大规模生产重组蛋白的潜力,这对于满足全球对rHSA日益增长的需求至关重要。激发的泛素被转移到泛素结合酶E2的活性位点半胱氨酸残基上,形成E2-泛素硫酯中间体。

EndoS糖苷内切酶S在抗体药物偶联物(ADCs)研究中的应用主要体现在糖链定点偶联技术上。通过上海药物所的研究,开发了一种新颖的糖链定点ADC制备策略,利用EndoS2这种糖苷内切酶,可以将小分子细胞毒药物“一步”定点连接到抗体的糖基化位点,实现了糖链定点ADC化合物的制备。定点偶联技术相比传统的随机偶联具有更好的方法指数,能够提高ADC的均一性和稳定性,是当前ADC领域的研究热点之一。在抗体的Fc结构域N297位,这是一个保守的糖基化位点,通过在该位点引入细胞物质,可以形成具有优势的糖链定点ADC化合物(glycosite-specificADCs,gsADCs)。此外,EndoS2对多样化的LacNAc修饰显示出良好的兼容性,能够高效获得功能修饰的糖工程抗体,并且可以用于抗体的内吞成像研究及糖链延伸等功能化研究。研究人员通过这种“一步”制备策略得到的糖链定点ADC化合物,在结构均一性、亲水性、体外稳定性以及体外活性方面表现良好,并且在体内瘤抑制活性方面,相比阳性对照ADC化合物,在低载药量的情况下具有更强的抑制效果。EndoS酶的这些应用,不仅展示了其在简化ADC制备流程中的潜力,还有助于推动定点ADC药物的深入发展,为未来的生物药物开发提供了新的思路和方法。Probe qPCR Mix (2×)通常含有热启动DNA聚合酶,这种聚合酶在高温下激发,可以减少非特异性扩增 。Recombinant Human IL-18 R1/CD218a Protein,His-Avi Tag
研究表明,优化后的Cas12a系统在多种细胞类型中表现出良好的编辑效率。Recombinant Mouse Serpin F1/PEDF Protein,His Tag
确保重组EGFP(增强型绿色荧光蛋白)在实验中的稳定性和活性,可以采取以下措施:1.**适当的储存条件**:重组EGFP通常以冻干粉形式提供,应在-20°C至-80°C的低温条件下储存,以保持其稳定性。避免反复冻融,因为这可能导致蛋白质结构的破坏和活性的丧失。2.**正确的复溶方法**:在无菌条件下,使用推荐的溶剂(通常是无菌去离子水或适当的缓冲液)复溶EGFP,并避免使用含有蛋白酶或氧化剂的溶液。3.**避免光照**:EGFP对光照敏感,尤其是在紫外和蓝光下。在处理和储存时应避光,使用遮光容器或在低光照条件下操作。4.**使用保护剂**:在某些情况下,添加蛋白稳定剂(如甘油、蔗糖或BSA)可以提高EGFP的稳定性。5.**避免极端pH**:EGFP的活性和稳定性可能受到pH值的影响。在实验中使用接近其等电点pH值的缓冲系统,通常是中性或略偏碱性的条件。6.**控制温度**:避免将EGFP暴露在极端温度下,尤其是在高温条件下,因为这可能导致蛋白质变性。7.**避免物理剪切力**:在操作过程中,避免剧烈搅拌或超声处理,因为这些可能会导致蛋白质结构的破坏。Recombinant Mouse Serpin F1/PEDF Protein,His Tag
ROR2属“孤儿”受体酪氨酸激酶,在肢体发育、软骨分化及病转移中担当Wnt5a关键共受体。本重组蛋白覆盖胞外Ig-like-Frizzled-Kringle全结构域(aa 34-403),由CHO-K1系统表达,二硫键与N-糖基化经肽图与LC-MS确认;C端His标签一步纯化,纯度≥97%,内素<0.03 EU/μg,支持体内外实验。功能验证显示,其以12 nM亲和力结合Wnt5a,可诱导成骨前体细胞极化;在斑马鱼胚胎显微注射模型中,2 ng ROR2明显挽救Wnt5a缺失所致“短鳍”表型。His标签兼容SPR、BLI及免疫共沉淀,助力解析ROR2-Wnt5a-FZD三元复合体动力学,并为抗R...