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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

该酶适用于在释放的聚糖结构上修剪半乳糖,用于外切糖苷酶阵列,或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖谱的抗体。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-连接的半乳糖;2. 有助于在亚基水平上识别糖基化修饰;3. 可固定在即用型离心柱中。Genovis的GalactEXO是一种外切糖苷酶,含有β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖残基。该混合物由两种半乳糖苷酶组成,可高效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖酶。GalactEXO在天然条件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的宽pH值范围内显示活性。水解ɑ2-3-连接唾液酸的冻干酶SialEXO 2-3,装在500个单位的小瓶中,用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。云南PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖:依那西普是一种融合蛋白,由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇,使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性,制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品:(i)携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白,(ii)用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构,以及(iii)用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基, 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品(图1)。作为比较,SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中,以将Fc区与大多数C端糖肽分离,以促进其表征。河北PNGaseF去糖基化酶N-聚糖在内质网zhong共翻译地连接到未折叠的蛋白质上;

糖蛋白性能测试:O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO,这些蛋白携带多达11个O-聚糖,这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理,而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。

Genovis的GlycOCATCH®是一种亲和树脂,可特异性结合O-糖基化(粘蛋白型)蛋白和肽,从而实现简单的工作流程,以富集和纯化携带O-聚糖的蛋白质和肽。洗涤离心柱,并用8M尿素洗脱结合的蛋白质。对洗脱材料的分析表明,由于洗脱O-糖基化蛋白,并且树脂与非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的结合可以忽略不计。选择性结合 O-糖蛋白:为了测试选择性,将一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白与Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。为了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特异性,将O-glcyosyled肽(糖蛋白)与一系列未修饰的肽混合。SialEXO是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶;

用于水解β1-3,4-连接半乳糖的固定化酶在离心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalactEXO酶,用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解,而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. z终样品中不含酶。GalactEXO 酶来源于 Akkermansia muciniphila 并重组表达,可有效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖。GalactEXO微离心柱经过格式化,可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。SialEXO 2-3唾液酸酶,对 α2-3连接的唾液酸靶向水解。河北PNGaseF去糖基化酶

使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变。云南PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

水解O-聚糖的酶不会从变性中获益,这就是为什么OmniGLYZOR色谱柱只能在天然条件下使用的原因。 OmniGLYZOR 试剂盒 Microspin 以含有足够材料的试剂盒形式提供,可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-连接聚糖的快速高效;与LC-MS兼容;完全去除聚糖,改进基础蛋白的分析;固定形式可提高酶与底物的比率,从而实现快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA®)和PNGaseF酶分别购自Genovis(马萨诸塞州,美国)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的冻干酶。Genovis的PNGase F 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 1000 或 5 x 1000 单位小瓶中,分别用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。云南PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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