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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。OglyZOR酶有效地水解了所有三种底物中的O-聚糖。吉林固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

糖蛋白性能测试:O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO,这些蛋白携带多达11个O-聚糖,这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理,而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。安徽N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究对游离的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脱唾液酸化。

Genvois的SialEXO产品是唾液酸酶,用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO冻干由两种唾液酸酶组成,每种唾液酸酶都具有独特的活性,并且它们同时起作用。一种酶对α2-3、α2-6和α2-8连接的唾液酸具有很好的活性,另一种酶(SialEXO 2-3)通过α2-3-键快速水解唾液酸。SialEXO冻干可在2小时内去除天然蛋白质上的所有唾液酸。SialEXO在天然条件下水解糖蛋白,在pH值范围为6.5至9时显示出活性。这些酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。两种酶都含有 His 标签,酶的分子量为 43 kDa 和 66 kDa。

Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用,但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。 为了证明PNGase F固定化和PNGase F冻干在天然反应条件下有效去除Fc N-聚糖,对zhiliao性抗体曲妥珠单抗进行了处理。图2中的质量数偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F冻干或PNGase F固定化孵育1小时后,曲妥珠单抗上的Fc N-聚糖成功去除,与在溶液中用PNGase F冻干处理的样品相比,没有酶干扰用PNGase F固定处理的样品的分析。SialEXO、FabRICATOR消化去糖基化蛋白,通过中级质谱测定完整质量数。

由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性,形成了重叠的肽,从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较,相同材料的标准胰蛋白酶消化物, 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位:OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽,并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。上海倍笃生物涵盖药物研发的全流程,抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。安徽N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

亲和纯化微离心柱,SialEXO 冻干 200 单位,OpeRATOR 冻干 200 单位。吉林固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

我们测量了FucosEXO从一组dai表不同键的不同寡糖底物中释放的岩藻糖。FucosEXO可有效释放α1-2、α1-3和α1-4连接的岩藻糖,对α1-6连接的岩藻糖残基没有活Genovis的FucosEXO的底物特异性:岩藻糖以不同的键存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖常见于 O-聚糖中,并作为 N-聚糖的天线岩藻糖基化,而 α1-6 连接的岩藻糖被发现是 N-聚糖he心的修饰。β1-3,4半乳糖的水解:Genovis的GalactEXO 是一种β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-连接末端半乳糖。吉林固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

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