常用抗体标记荧光染料的特性及其应用
1、FITC:激发波长488nm，比较大发射波长525nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。2、AlexaFluor488:激发波长488nm，比较大发射波长519nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪:2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术;4)在较宽的PH值范围内保持稳定(PH4~10)。5)南京星叶生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）质优价廉，欢迎咨询。3、Cy3:激发波长488nm，比较大发射波长570nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测:3)适用于荧光显微镜技术;4)为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。 D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。中国香港荧光染料水溶
CY5.5-NHS荧光染料是一种广泛应用于生物标记和成像的荧光染料，CY5.5-NHS荧光染料具有优异的荧光性能。其激发波长约为675nm，发射波长约为695nm，位于红色光谱区域，这使得它在生物样本中具有较强的穿透力，能够深入组织内部进行标记和成像。此外，CY5.5-NHS荧光染料具有较高的荧光量子产率和光稳定性，可以在较长时间的激发下保持稳定的荧光信号，从而确保实验结果的准确性和可靠性。CY5.5-NHS荧光染料作为一种***的荧光染料，在生物科学研究领域具有广泛的应用前景。其优异的荧光性能、良好的生物相容性、***的适用范围以及易于合成和修饰的优点，使得它成为生物医学研究中不可或缺的重要工具。中国香港荧光染料水溶染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。
南京星叶生物科技有限公司各类荧光染料
多肽、蛋白、抗体标记：5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像：脂溶性荧光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性荧光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近红外I区/II区荧光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO
一种发光杂环化合物，存在于生物发光的生物体中，如萤火虫。在含有三磷酸腺苷的情况下，通过荧光素酶氧化脱羧产生光。可用于荧光素酶生物发光成像和细胞高通量筛选应用。D-荧光素（D-Luciferin）是萤火荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。反应原理：首先，在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物***成像系统配套使用，用于标记LUC基因后的体内***荧光检测。D-荧光素游离酸（D-Luciferin,freeacid）、D-荧光素钾盐（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-荧光素钠盐（D-Luciferin,sodiumsalt），钾盐、钠盐的形式是**通用的，因为它们都易溶于水。钾盐也是***动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于细胞核染色，可将细胞核染成蓝色。
1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备（1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。注意：未使用的储存液保存在-20°C，避免反复冻融。（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5µM的工作液。注意：工作液的**终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找比较好条件。
2.悬浮细胞染色（1）悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞比较好培养时间不同。（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。（5）重复（3），（4）步骤两次以上。 Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。中国香港荧光染料水溶
与花青和罗丹明染料一样，荧光素也是一种有机染料。中国香港荧光染料水溶
过标记——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团大于10mol。虽然过标记的蛋白也可以使用，但可能会引起蛋白的聚集、降低抗体结合抗原的特异性，这些都会造成非特异性结合。过标记还会引起荧光淬灭。可以增加蛋白或减少反应时间。3．未结合染料难以去除——尽管大部分时候用分离柱可以较好的纯化蛋白偶联物，但仍可能会有痕量的游离染料留在偶联物溶液中，会使标记计算的值偏高。可用分离柱再次分离或透析去除。4．蛋白或蛋白偶联物无法洗脱——不要再加缓冲液，只需再次离心一次或几次。中国香港荧光染料水溶
