三、细胞实验D-荧光素钾盐体外生物发光试验：D-荧光素钾盐，无菌纯水，完全培养基（自行配制）1、贴壁细胞：将细胞接种于培养板中孵育数小时或过夜，使细胞贴壁。悬浮细胞：可以将细胞接种于培养板后直接进行后续操作，无需孵育。如果倍增时间相对较短，则应考虑倍增时间进行细胞计数。2、将15mg荧光素钾盐溶解于1ml无菌水中，制备成100X荧光素储备液（15mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素钾盐完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。3、用预热好的细胞培养基1∶100稀释100X荧光素储备液（15mg/ml），配制成荧光素工作液（终浓度150μg/ml），即配即用。4、去除培养板中的培养基。5、在成像前，将适量荧光素工作液加入细胞中，然后进行图像分析。注意：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。孵育时间取决于特定的细胞类型。一般来说孵育10分钟就足够了，根据需要进行测试和调整。6、每隔10分钟，**多40分钟，使用VILBERFUSIONFX成像系统检查体外生物发光，确定动力学曲线并找出细胞的峰值成像时间点Cy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右。贵州免疫荧光荧光染料
琥珀酰亚胺酯（Succinimidylesters）/NHS酯活性荧光染料用于标记抗体，蛋白质，肽，胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离氨基（-NH2）2、马来酰亚胺（Maleimides）活性荧光染料用于标记抗体，蛋白质和肽上的巯基3、叠氮化物(Azides)活性荧光染料通过点击化学法（Click）标记乙烯基4、炔烃(Alkynes)活性荧光染料通过点击化学方法标记叠氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性荧光染料经碳二亚胺预活化后用于标记胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性荧光染料具有游离氨基的荧光染料，用于与各种亲电子化合物（如活化的酯和环氧化物）偶联。贵州免疫荧光荧光染料生物发光是利用荧光素酶报告基因在体内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。
荧光染料标记蛋白或肽技术是一种常见的蛋白质体外标记技术。除了GFP等荧光蛋白的融合表达外，目标蛋白还可以通过荧光染料标记直接进行下游实验操作，如***跟踪、细胞分选等。
FITC荧光标记的原理是什么？
荧光标记所依赖的化合物称为荧光材料。荧光材料是指具有共轭双键系统化学结构的化合物。当受到紫外线或蓝紫光的照射时，它可以被刺激为刺激状态。当激发状态恢复到基本状态时，它会发出荧光。蛋白质荧光标记技术利用荧光材料的共价结合在目标分子的基团上，利用其荧光特性提供研究对象的信息。
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程（1）将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中（也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基）。（2）在37℃培养细胞10～20分钟。（3）用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。（4）用535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事项：PI对人体有刺激性，请注意适当防护。与花青和罗丹明染料一样，荧光素也是一种有机染料。
小动物***荧光成像技术是现***物医学研究领域的一项重要技术，因其具有操作简单、实时直观、灵敏度高、实验成本低等特点，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。纳米材料在生物医学领域得到广泛应用，旨在解决传统医学面临的各种医学挑战，包括生物利用度差，靶向特异性受损，全身和***毒性等。纳米材料具有很多与众不同的优点，比如多功能性、大的负载量、靶向性、血液循环时间长等。纳米材料在生物医学中起着关键作用，可以有效携带成像探针、***剂或生物材料并传递至靶点，如特定的***、组织甚至细胞。光学成像主要包括生物发光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）两种技术。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）标记细胞或ＤＮＡ，其表达产物与莖火虫素类底物反应产生荧光。后者包括多种荧光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有机荧光染料、荧光上转换纳米粒子、量子点等的应用。 D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。蛋白质荧光染料Fluor 750
南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列）。贵州免疫荧光荧光染料
CY5.5-NHS荧光染料是一种广泛应用于生物标记和成像的荧光染料，CY5.5-NHS荧光染料具有优异的荧光性能。其激发波长约为675nm，发射波长约为695nm，位于红色光谱区域，这使得它在生物样本中具有较强的穿透力，能够深入组织内部进行标记和成像。此外，CY5.5-NHS荧光染料具有较高的荧光量子产率和光稳定性，可以在较长时间的激发下保持稳定的荧光信号，从而确保实验结果的准确性和可靠性。CY5.5-NHS荧光染料作为一种***的荧光染料，在生物科学研究领域具有广泛的应用前景。其优异的荧光性能、良好的生物相容性、***的适用范围以及易于合成和修饰的优点，使得它成为生物医学研究中不可或缺的重要工具。贵州免疫荧光荧光染料
