罗丹明属于呫吨族。与市场上的许多其他染料相比,罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。它们在聚合物纳米粒子表面的表征、聚合物-生物偶联物的检测、活细胞的成像以及寡核苷酸在胶乳上的吸附分析等方面特别有用。罗丹明荧光染料的衍生物也用作:分子开关,病毒表面修饰,化学传感器,硫醇。不同类型的染料通过它们各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)来区分。由于它们的差异,这些荧光染料在溶液中也表现出不同的光物理特性(例如不同的荧光寿命和发射比较大值)。氨基被刚性化的罗丹明染料无论温度范围如何都表现出高量子产率,而在每个氮处具有两个烷基取代基的那些表现出活化的内部转化,量子产率和荧光寿命随温度的变化而变化。罗丹明101和罗丹明B是一些**常用的罗丹明染料具有以下特点:--羧基倾向于在酸性溶液中质子化--染料转化为两性离子碱性溶液--两性离子染料在极性较小的有机溶剂中变为无色内酯要将罗丹明用作荧光探针,必须对其进行修改。这可以通过(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基环或羧酸基团的修饰来实现。与TRITC一样,罗丹明(NHS-rhodamine)的荧光特性为544nm(比较大吸收波长)和576nm(比较大发射)。与花青和罗丹明染料一样,荧光素也是一种有机染料。细胞荧光染料脂质
绿色荧光染料ICG的主要作用吲哚菁绿(IndocyanineGreen,简称ICG)是一种广泛应用于医学和生物领域的荧光染料。它具有独特的化学结构和性质,因此被***用于荧光显像、光热***、生物识别和药物输送等领域。吲哚菁绿的绿色溶解度是其在水中的溶解度,它是衡量该染料在溶液中的溶解能力的重要指标。吲哚菁绿具有较好的水溶性,可以在水中迅速溶解,形成稳定的溶液。这一特性使得吲哚菁绿在医学诊断和***中得到广泛应用。吲哚菁绿的主要作用之一是在医学影像学中作为造影剂。由于其具有强烈的荧光特性,能够在近红外光谱范围内吸收和发射光线,因此被***用于近红外荧光显像技术中。在临床中,医生可以通过注射吲哚菁绿溶液,利用近红外光源对患者进行显像,以观察和评估病变部位的血液灌注情况、淋巴引流途径等。这为医生提供了非侵入性、实时性的影像信息,有助于准确诊断和指导***。此外,吲哚菁绿还在光热***中发挥着重要作用。光热***是一种利用光热效应杀灭肿瘤细胞的方法。吲哚菁绿可以吸收近红外光并将其转化为热能,从而使附近的肿瘤细胞受热破坏。这项技术在*****中具有巨大潜力,因为它可以实现高度精细的***,同时比较大限度地减少对周围正常组织的损伤。湖南荧光染料Cy7 DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料,这个染料常用于标记细胞质膜。
CY5.5-NHS荧光染料是一种广泛应用于生物标记和成像的荧光染料,CY5.5-NHS荧光染料具有优异的荧光性能。其激发波长约为675nm,发射波长约为695nm,位于红色光谱区域,这使得它在生物样本中具有较强的穿透力,能够深入组织内部进行标记和成像。此外,CY5.5-NHS荧光染料具有较高的荧光量子产率和光稳定性,可以在较长时间的激发下保持稳定的荧光信号,从而确保实验结果的准确性和可靠性。CY5.5-NHS荧光染料作为一种***的荧光染料,在生物科学研究领域具有广泛的应用前景。其优异的荧光性能、良好的生物相容性、***的适用范围以及易于合成和修饰的优点,使得它成为生物医学研究中不可或缺的重要工具。
所需的CY3-NHS酯的量取决于待标记蛋白的量,以及CY3-NHS的比较好摩尔比为10。示例:假设所需的标记蛋白为500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯体积为5.05μL,详细计算过程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.运行偶联反应1)将室温新鲜制备的10mg/mLCY3-NHS酯缓慢加入到0.5mL蛋白质样品中于溶液中,轻轻摇动混匀,然后短暂离心,将样品收集于反应管底部。请勿混匀,否则2)将反应管安置避光处,在接下来的间隔轻轻蛋白水解60分钟。10-15分钟,轻轻翻转几次以充分混合5.偶联偶联物以下方案是使用SepHadexG-25柱封闭染料-偶联偶联物的范例。1)根据制造说明准备SepHadexG-25柱。2)将反应混合物(来自“Runconjugationreaction”)加载到SepHadexG-25柱的顶部。3)一旦样品在顶部树脂表面下方运行,立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需样品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料,具有广泛的应用,作为抗体和其他探针标记,用荧光显微镜,流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性,是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质(特别是抗体)的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物,以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。脂质荧光染料Cy3
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。细胞荧光染料脂质
第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料,**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺,具有向A-T富集区插入的趋势,因此后者不常使用。与DAPI相似,此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值,在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用,因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是,Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中,因为该染色剂无法进入完好的细胞内,所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂,但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下,其比较大激发波长为538nm,比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA,必须使用足够的聚合酶。细胞荧光染料脂质