湖北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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PNGaseF去糖基化酶基本参数

品牌
Genovis
型号
L1-F02-025

PNGaseF去糖基化酶企业商机

由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性，形成了重叠的肽，从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较，相同材料的标准胰蛋白酶消化物，显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位：OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽，并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。连接的岩藻糖残基，而对于非常复杂的样品可能需要更长的孵育时间。湖北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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使用Genovis的GalNAcEXO 对 O-糖基化生物制药进行 Tn 抗原表征：未成熟的截短O-聚糖导致了复杂生物制药的异质性，使其分析更具挑战性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc残基组成，通过糖苷键与丝氨酸或苏氨酸连接，称为Tn抗原。现在，使用GalNAcEXO可以采用合适的酶策略来去除这些GalNAc并简化生物制药的表征。在质谱图中可以观察到重复峰的模式。其次，在与GalNAcEXO酶孵育后，剩余的GalNAc残基被完全去除，留下一个峰。因此，该工作流程确认了 O-糖基化生物制药上存在 Tn 抗原，并允许定量he心 GalNAc 水平。这种工作流程的另一个好处是减少了剩余的异质性，这有助于确认蛋白质的完整质量，并揭示截短的片段。陕西高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶GalNAcEXO固定化离心柱用于水解糖蛋白上的GalNAc残基。

在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后，在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基，应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性，使其与大多数样品相容。此外，GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子，如BSA。根据底物的性质，糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成，而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中，以便快速方便地处理样品，在制备过程中不会残留酶。

Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交体或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。在反应过程中，从中去除聚糖的天冬酰胺残基被脱酰胺为天冬氨酸。释放的低聚糖完好无损，可用于进一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的样品制备，以降低蛋白质的异质性，使游离的糖分析成为可能，并研究N-糖的功能作用。该酶在大肠杆菌中表达，该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。评价抗体片段对完整蛋白聚集的影响。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生产。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦双触角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。而用其他岩藻糖酶处理部分去除岩藻糖或根本没有去除。

GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis的OpeRATOR酶，该酶经过工程设计，可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。结合在pH 5-8的生理缓冲液中进行。由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用，可以用8M尿素进行洗脱。或者，可以使用活性OpeRATOR酶进行洗脱，该酶消化O-聚糖位点的N末端结合的O-糖蛋白。在后一种情况下，肽在天然条件下回收。OpeRATOR 冻干酶包含在购买中。由于 O-糖蛋白上的旋亚氨酸化 O-聚糖与树脂结合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 冻干也包含在购买中。倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程，抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。福建冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

实现高通量 N-糖去除，简化糖蛋白底物的下游分析。湖北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物并产生了相似的糖肽，但预期的聚糖种类不同。用ImpaRATOR处理的样品比其他样品含有更多的变异，因为每种肽都检测到多种聚糖结构。观察到的聚糖种类主要是单唾液酸化和二唾液酸化he心1结构，这与依那西普的预期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO预处理样品均产生具有裸核1结构的肽，但携带在ImpaRATOR消化样品中观察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 预处理，然后用 ImpaRATOR 消化，得到含有 Tn 抗原的肽。总之，这些数据证明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR处理的依那西普显示出与相应的去唾液酸化OpeRATOR处理样品略有不同的消化模式。例如，OpeRATOR在两个O-糖基化氨基酸之间消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱（数据未显示）。湖北瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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