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高盐核酸酶基本参数
  • 品牌
  • ArcticZymes Technologies
  • 型号
  • 70921-202/70921-150/70921-160
  • 货号
  • 70921-202/70921-150/70921-160
  • 中文描述
  • SAN HQ高盐核酸酶
  • 规格
  • 25kU/500kU/5MU
  • 级别
  • HQ及GMP
  • 应用领域
  • 大规模生物药生产中，去除核酸残留
高盐核酸酶企业商机

三种AAV载体的生产体系（三质粒瞬转体系、杆状病毒表达载体体系以及包装细胞体系） 中都会出现三种衣壳：完整衣壳（full capsid）、部分衣壳（partial capsid），和空衣壳（empty capsid）。其中完整衣壳包含正确的DNA序列，是人们所期待的产品；部分衣壳和空衣壳包含部分不包含目的基因，属于生产中的杂质，约占细胞生产的总AAV颗粒的50%-90%。空衣壳/部分衣壳有如下几种危害：1), 影响产品的纯度，2), 增加终产品的免疫原性，3), 与完整衣壳竞争infection细胞上的载体结合受体，抑制完整衣壳的转导，4),增加总体病毒载量。部分衣壳与空衣壳地存在严重地影响了AAV产品的安全性和有效性，因此监管机构强烈建议在整个生产过程中监控空/完整衣壳比（空壳率）。高盐浓度下，宿主DNA与蛋白质能够更高效解离，从而更容易被降解。苏州70921-150高盐核酸酶供应商

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综合腺相关病毒AAV制备的三个工艺阶段介绍，可以看出下游处理可以占病毒生产总成本的很大一部分，而且难度也是非常大，尤其是纯化过程。原因之一是由于有超过100种不同血清型的变体AAV衣壳，不同血清型的AAV蛋白存在差异。因此，各种血清型的表面特性增加AAV纯化难度。原因之二是：针对工艺和产品相关的杂质（包括宿主细胞物质，DNA和空衣壳），缺乏一个有效和可重复的平台方法，尤其是来从空衣壳中分离出完整的衣壳。为了解决以上问题，国内外大的药企公司都致力于纯化新产品的开发，以期达到：（1）实现病毒颗粒的分离（2）减少产品相关杂质（3）保持效力和产量的目标。南京倍笃生物高盐核酸酶报价表染色质的双螺旋结构影响DNA的检测与酶切处理。

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基因疗法制造商面临的挑战与抗体疗法刚出现时单克隆抗体制造商面临的挑战相似。例如，在生产、储存和处理过程中，单克隆抗体也会受到低滴度、产品和工艺相关杂质和降解的挑战。尽管与重组单克隆抗体相比，单剂量AAV产品与工艺相关杂质相关的风险可能更低（取决于杂质的类型、剂量和给药途径），但这也不能忽视。由于这些相似性，制药商、化学品和辅料供应商有机会进行合作，并开发创新的解决方案，以实现稳健和成本效益高的AAV产品生产。

宿主细胞DNA（HCD）残留以染色质形式存在，其中有带负电荷的DNA、带正电荷及疏水区段的组蛋白，就像胶带一样能够吸附很多物质，包括各种杂蛋白、色谱填料、目的病毒颗粒。非特异吸附杂蛋白，会影响蛋白杂质（如HCP）等的去除；吸附到色谱填料上，会降低色谱分离纯化效率；吸附到目的病毒颗粒时，会影响目的产物的稳定性，从而降低目的产物的得率。因此，从生产工艺层面来讲，一定要去除HCD，从而能够简化工艺、提高目的产物的产量。SAN HQ高盐核酸酶有助于减少了宿主细胞残留DNA的污染，提高了基因药物的安全性。

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离子交换层析 (IEC) 是一种简单、通用且经济高效的技术，已成为许多载体纯化的关键步骤。IEC分为阴离子/阳离子交换柱，其中AEC（Anion-exchange chromatography）适用于AAV纯化，是大规模AAV生产中去除空衣壳的主要手段。AAV衣壳亚种之间因表面电荷的差异导致不同的的等电点。空衣壳PI在6.3左右，包装了完整基因组DNA后的病毒颗粒PI大致为5.9。AAV与基质之间的静电相互作用正是取决于衣壳的等电点(pI)和缓冲液的pH值。基于这一原理在正电荷固定相上进行样品的分离纯化，去除杂质（如空衣壳和部分衣壳），并有效地回收目的载体。鉴于生物制品药物更严格的质量要求，厂家对SAN HQ高盐核酸酶的生产及质控符合更高标准。泰州高盐核酸酶

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AAV病毒滴度通常分为物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因组滴度或者衣壳滴度。在测定AAV的含量时，通常采用基因组滴度或者衣壳滴度作为单位，其中基因组滴度为携带基因组的AAV的浓度，衣壳滴度为AAV物理颗粒的浓度。基因组滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法来测定；衣壳滴度主要是通过ELISA、HPLC等方法来测定。AAV基因组滴度检测的关键在于尽可能彻底去除AAV衣壳外的HCD残留，减少污染核酸对qPCR或ddPCR的影响。经典方法是加入常规核酸酶（如Dnase I、Benzonase等）消化AAV衣壳外的HCD残留，然后加入Proteinase K破碎病毒衣壳，进行后续检测。经过对比发现，用SAN HQ高盐核酸酶替代常规核酸酶处理AAV病毒，能够更高效去除衣壳外的核酸残留，qPCR或ddPCR结果重复性更高、更稳定。苏州70921-150高盐核酸酶供应商

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